EB病毒裂解期DNA复制的研究概况.doc

 华 夏 医 学 第 13 卷 第 1 期 2000 年 2 月 V o l. 13 N o. 1 F eb. 2000 A C TA M ED IC IN A E S IN ICA EB 病毒裂解期 DN A 复制的研究概况 曾 越 (法国里昂第一大学免疫病毒分子生物学实验室) Ep ste in2B a r r 病毒 (EB 病毒) 属人类疱疹病毒, 是传染性 单核细胞增多症, B u rk it t 淋巴瘤和鼻咽癌的主要诱发因素, 其 中 鼻咽癌在我国南方, 特别是广东和广西等省 ( 区) 发病率很 高 (10～ 30?100 000) , 占癌症发病率首位。 此外, EB 病毒与 T 淋巴细胞瘤, 口腔腺体肿瘤, 胸腺瘤, 器官移植后淋巴瘤等肿 瘤的病因关系在国际上也有报道1, 2 。 EB 病毒进入宿主细胞后, 处于潜伏期, 病毒基因组持续 存在于细胞内, 只有少量病毒蛋白表达。超早期蛋白的出现标 志着病毒周期进入裂解期, 其中包括早期, DN A 复制期和晚 期。 早期病毒蛋白主要用于 DN A 复制, 而晚期蛋白是一些壳 蛋白和膜蛋白, 用以包装复制完成的 DN A , 形成病毒颗粒。一 个完整的病毒周期如图 1 所示。病毒在裂解期的DN A 复制是 它在细胞里繁殖的重要阶段, 因此对这个过程的研究是了解 病毒作用机理和抵抗疾病的重要一环。 2 EB 病毒裂解期 DN A 复制的参与蛋白 1992 年, F ixm an 等6 研究了 EB 病毒基因组不同片段对 含有 O r ily t 质粒复制的影响, 实验证明有 6 种蛋白对病毒的 DN A 复制是必不可少的, 它们分别是: ZEBRA 蛋白, DN A 多 聚酶及其辅助蛋白 EA 2D , 解链酶和引物酶的复合体, 还有主 要 DN A 结合蛋白 P 135。 ZEBRA 蛋白: 这是一个超早期蛋白, 由 245 个氨基酸组 成。它不仅是一个转录活化因子7 , 可以激活一些早期蛋白的 转录, 而且可以识别 O r ily t, 对病毒 DN A 复制起着重要作用。 转录因子在 DN A 复制过程中发挥作用的例子屡见不鲜, 如 A P 18 , V P 169 和 Ga1410 , 它们的作用机理可以大致分为: 一方面通过与 DN A 特殊序列相结合而改变基因组复杂的空 间结构, 使其他 DN A 复制蛋白容易进入复制区; 另外转录因 子可以通过与复制蛋白的结合, 把它们装置在复制起始位点 上, 共同完成 DN A 复制的使命。 解链酶与引物酶的复合物: 它由 3 个蛋白结合而成, 其中 包括解链酶, 引物合成酶和它们的结合蛋白6 。目前国际上对 这个蛋白复合物的研究有限, 但对单纯疱疹病毒 (H S 病毒) 的 同源复合蛋白了解较多, 由此可以推测其功 能: 使 两 条 母 链 DN A 分离, 合成 RN A 引物, 供 DN A 多聚酶合成 DN A 。 第三 个结合蛋白的功能可能是与另外两个酶结合, 形成复合物, 并 11 促进这两个酶的活性。 Gao 等 的实验证明只有三个蛋白同 时存在, 这个复合物才会出现在细胞核中, 缺 少 其 中 任 何 一 个, 另外两个蛋白都只分布在细胞浆里, 不能参与 DN A 复制。 图 1 EB 病毒在宿主细胞里的繁殖周期 1 EB 病毒裂解期 DN A 复制的起始位点 在 1988 年, H amm e r schm id t 和 Sugden 3 通过对带有 EB 病毒基因组不同片段的质粒复制能力的分析, 确定病毒基因组 上两段相同的序列为裂解期 DN A 复制起始位点, 它们被命名 为 O r ily t。 这两个 O r ily t 位点之中任何一个都可以使 DN A 进 行复制, 至于病毒在进化过程中为什么会保留两段功能相同的 O r ily t, 有可能它们在不同的宿主细胞内, 或在细胞周期的不同 阶段所起的作用不同: 也有可能是它们可以交替使用, 为确保 病 毒 在 被 选 择 的 过 程 中 占 据 优 势。O r ily t 的 中 心 部 分 约 1, 4k b , 由两个带有重复序列的‘基本区’和一段‘辅助区’构成。 ‘基本区’的碱基空间序列呈螺旋状, 其中一个碱基的改变可以 使整个带有 O r ily t 的质粒失去 DN A 复制功能4 , 而‘辅助区’ 虽非缺之不可, 但它的存在可以大大提高质粒的复制。 此外, O r ily t 上有七个 ZR E 位点, 这些位点可以被病毒超早期蛋白 ZEBRA 识别, 其中四个位点是 DN A 复制所必不可少的5 。 DN A 多 聚 酶 及 其 辅 助 蛋