荧光光谱法研究钙试剂羧酸钠与牛血清白蛋白结合反应特征.PDFVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究报告 第 6期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 6月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 759 ～762 荧光光谱法研究钙试剂羧酸钠与牛血清白蛋白结合反应特征 颜承农 　张华新 　鞠 　香 　梅 　平 刘 　义 　潘祖亭 (长江大学化学与环境工程学院 ,荆州 434020) (武汉大学化学与分子科学学院 ,武汉 430072) 摘 　要 　不同温度下 ,研究了钙试剂羧酸钠与牛血清白蛋白作用的荧光猝灭光谱 、同步荧光光谱 、三维荧光光 谱和紫外可见吸收光谱特征 ;分别用 SternVo lm er方程和 L ineweaverBu rk 双倒数方程等处理实验数据 ,得到 了 26 ℃时反应的结合常数为 7. 664 ×104 mol/L , 结合位点数为 1. 522 ,结合反应的标准焓变 、标准熵变和标准 吉布斯自由能变分别为 - 58. 36 kJ /mol, - 10 1. 7 J / K和 - 27. 958 kJ /mo l;分析所得光谱 ,证实了在实验浓度 和温度范围内, CCS与 B SA 反应可形成具有一定结构的复合物 ,获得了 CCS对 B SA 构型的影响等重要信息 。 关键词 　钙试剂羧酸钠 ,牛血清白蛋白,荧光猝灭光谱 ,三维荧光光谱 ,吸收光谱 ,热力学参数 1　引　　言 在蛋白质组学的研究中 ,运用核磁共振技术和荧光光谱技术等研究某些金属离子或有机小分子与 蛋白质等生物大分子相互作用模式和作用特征 ,发现如药物等有机小分子的作用靶和作用前后蛋白质 分子构型的变化 ,借以获取蛋白质分子的有关信息 ,对于研究药物的药理作用 、毒物的毒理作用及环境 [ 1 ] ( ) 污染物对生命物质的影响等均具有重要意义 。钙试剂羧酸钠 calconcarboxylic sodium , CCS 又名钙 红 ,是一种金属离子络合剂 ,主要用作测定钙离子和铀酰离子等的显色剂 ,还可用于镓 、锆和稀土元素的 极谱分析 。本实验用荧光光谱和紫外 可见吸收光谱研究在模拟人体生理条件下 CCS与牛血清 白蛋白 ( bovine serum album in , B SA ) 结合反应的特征 ,得到反应的结合常量和热力学参数等 ,为了解 CCS与 B SA 的结合方式和 CCS对 B SA 构型的影响等提供重要信息 。 2　实验部分 2. 1　仪器与试剂 ( ) ( ) L S55荧光分光光度计 美国 PE 公司 ; UV 1100 紫外 可见分光光度计 北京瑞利分析仪器公司 ; ( ) ( ) A Y120 电子分析天平 日本岛津公司 , SYC15超级恒温水浴 南京桑力电子设备厂 。 CCS (C H O N SN a,北京化工厂 , 摩尔质量为 460. 4 )溶液 : 2. 5 ×10 - 4 mo l/L ,使用时稀释至所需 2 1 13 7 2 ( ) - 4 浓度 ; B SA 上海生物化学制剂厂 溶液 : 1. 0 ×10 mo l/L ; N aC l溶液 : 0. 5 mo l