通过串联启动子实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌中的高效-现代食品科技.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.11 通过串联启动子实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌中的 高效表达 葛春蕾，刘中美，崔文璟，周丽，郭军玲，胡云峰，周哲敏 （江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 214122） 摘要：本研究通过串联启动子方式实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌 WB800 中的高效分泌表达。通过对几种现有报道的强启动子的 比较并对其进行串联操作，确定生产纳豆激酶的最优启动子及纳豆激酶的最高产量。本研究首先在枯草芽孢杆菌WB800 中成功构建 五种含不同强启动子的重组质粒 pSG101 （P ），pSG102 （P ），pSG103 （P ），pSG104 （P ）和pSG105 （P ），实现纳豆 HpaII BcaprE luxS gsiB yxiE 激酶分泌表达，并对其纤溶活性进行测定。结果表明，启动子PHpaII 介导的纳豆激酶纤溶活性（110.80 FU/mL ）明显优于其他四种启 动子。通过对启动子 PHpaII 进行多次串联，成功构建质粒 pSG106 （PHpaII-PHpaII ），pSG107 （PHpaII-PHpaII-PHpaII ）和 pSG108 （PHpaII-PHpaII-PHpaII-PHpaII ）。数据显示，菌株Bacillus subtilis WB800/pSG107 （PHpaII-PHpaII-PHpaII ）纳豆激酶产量最高为213.30 FU/mL ， 相比单个启动子 PHpaII ，提高了 92.51%。通过对五种强启动子的比较以及对其进行串联操作，成功实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800 的高效表达，纤溶活性最高为213.30 FU/mL ，与现有相关报道相比有明显优势。 关键词：纳豆激酶；串联启动子；分泌表达；枯草芽孢杆菌WB800 文章篇号：1673-9078(2016)11-72-77 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.11.011 Efficient Overexpression of Recombinant Nattokinase in Bacillus subtilis by Tandem Promoters GE Chun-lei, LIU Zhong-mei, CUI Wen-jing, ZHOU Li, GUO Jun-ling, HU Yun-feng, ZHOU Zhe-min (The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China) Abstract: In Bacillus subtilis WB800, the efficient secretory expression of nattokinase by tandem promoters