牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用-华中农业大学学报.pdfVIP

第 29 卷 第 2 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 29 　No . 2 20 10 年 　4 月 J ournal of Huazhong A gricult ural U niver sit y Ap r . 20 10 ,203～207 牙鲆弹状病毒环介导等温扩增 检测方法的建立与应用 1 , 2 3 4 3 孙颖杰 　岳志芹 　刘 　荭 　赵玉然 4 3 2 2 1 史秀杰 　梁成珠 　吴 　斌 　李 　叶 　王 　哲 1. 吉林大学畜牧兽医学院 , 长春 130062 ; 2 . 辽宁出入境检验检疫局 , 大连 11600 1 ; 3 . 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 , 青岛 266002 ; 4 . 深圳出入境检验检疫局 , 深圳 51800 1 ( ) 摘要 　建立了牙鲆弹状病毒的环介导等温扩增 loopmediat ed i sot hermal amp lification ,L A M P 检测方法 , 首先根据牙鲆弹状病毒的糖蛋白的基因保守序列 ,利用 Primer Explorer V3 软件设计了 6 条引物 ,并对 L A M P 反应温度和反应时间等条件进行了优化 。该方法的检测限为 30 f g RN A , 比常规 R TPCR 灵敏度高 100 倍 ,与 鲤春血症病毒 、传染性胰脏坏死病毒 、传染性造血器官坏死病毒 、海洋双 RN A 病毒 、病毒性出血败血症病毒以 及病毒性神经坏死病毒等没有交叉反应 。该方法检测时间短 ,在 1 h 内即可完成检测 。用建立的L A M P 方法对 临床鱼样进行了检测 ,结果表明40 尾石鲽鱼样品中有 3 尾感染 H RV ,与病毒分离结果一致 ,说明L A M P 方法 比较适合牙鲆弹状病毒的早期及现场诊断 。 关键词 　牙鲆弹状病毒 ; 环介导等温扩增 ; 聚合酶链式反应 ; 检测 ( ) 中图分类号 　Q 937 . 47 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000242 1 20 10 ( 　　弹状病毒是硬骨鱼类病毒中数量最多的群体之 的检测需求 。环介导等温扩增 loopmediat ed i so 一 ,它与水产养殖的流行病及重大经济损失有关[ 1 ] 。 t her mal amp lification ,L A M P) 技术是日本学者 No ( ) to mi 等于 2000 年开发的一种新颖的恒温核酸扩增 牙鲆弹状病毒 hirame r hab dovir u s , H RV ,属于弹 状病毒科 ,诺拉弹状病毒属 ,病毒粒子呈枪弹形 ,大 方法[9 ] 。L A M P 技术因其具有高特异性 、高效率和 ( ) 小为 80 nm × 160～180