细胞凋亡在颌骨骨折愈合过程中的发生及意义（The occurrence and significance of apoptosis in the healing of jaw fracture）.docVIP

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2017-09-02 发布于河南
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细胞凋亡在颌骨骨折愈合过程中的发生及意义（The occurrence and significance of apoptosis in the healing of jaw fracture）

细胞凋亡在颌骨骨折愈合过程中的发生及意义（The occurrence and significance of apoptosis in the healing of jaw fracture） The occurrence and significance of apoptosis in the healing of jaw fracture Update Date: 2011-07-22, Si Xiaohui, Jin Yan, Yang Lianjia Materials and methods 1. main materials and reagents: healthy adult male rabbits (1.6 ~ 2.2 kg) 24, provided by our school Animal Center; TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) kit purchased from the United States Oncor company. 2. fracture model and sample processing: general anesthesia on rabbit 30 g/L of pentobarbital sodium concentration (1 ml/ kg), in rabbit mandibular unilateral antegonial notch at the dental turbine caused by complete fracture, wire fixation, sutured periosteum, muscle and skin. Respectively after first, 3, 5, 7, 11, 14, 21 and 28 days (3 rats at each time point were used before the animal), the concentration of 40 g/L paraformaldehyde perfusion fixed, and then remove the bone stump and surrounding tissue, 4 C fixation after 4 h. Conventional decalcified, paraffin embedded, sliced 5 m thick, HE staining. 3. TUNEL法检测细胞凋亡：切片脱蜡，PBS (14.5 g/L Na2HPO4.12H2O,1.48 g/L NaH2PO4.2H2O, 11.7 g/L NaCl, pH 7.5)洗5 min，蛋白酶K（20 μg/ml）37℃孵育15 min；PBS洗后，在体积分数为3%的 H2O2/ PBS中37℃孵育5 min；PBS洗后，加25 μl平衡缓冲液，37℃孵育1 min；加25 μl TdT酶，37℃孵育2 h后，加37℃预热的中止缓冲液，37℃孵育30 min，每10 min更换中止缓冲液 1次；缓冲液 A (12.11 g/L Tris-HCl, 8.78 g/L NaCl, pH 7.5)洗后，正常羊血清37℃封闭30 min；加Anti-DIG-AP，37℃孵育2 h；缓冲液A洗后,用缓冲液 B (12.11 g/L Tris-HCl, 5.85 g/L NaCl, 5.05 g/L MgCl2.6H2O, pH 9.5)洗5 min，NBT/ BCIP显色30 min，脱水，透明，封片。 Two, the results 1. HE observation: first days after fracture, the bone gap filling by hematoma hematoma third days; start machine, fibroblasts and capillary sprouts into the blood clot formation of granulation tissue; fifth days, fracture stimulation endosteum and periosteum germinal cell differentiation proliferation and migration of bone to gradually end off; seventh days, the new bone trabeculae increased significantly, peripheral osteoblasts; cartilag