一株高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建.PDF

卷 期 ! 微 生 物 学 报 ’( )! 0’ ) 年 月 #$$ %$ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,’-./ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 一株高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建 赵 清 刘相梅 詹 杨 林建群 颜望明 （山东大学微生物技术国家重点实验室 济南 #$%$$ ） 摘 要：利用 体外重组技术，将大肠杆菌质粒载体 上的抗砷基因簇片段亚克隆到含有强启动子（ 启 M0N OPQ3 !# 动子）并具有广泛寄主范围特性的 族质粒 上，删除调节基因片段，构建了含有强启动子、可在 基因 RC+S OQQ5#! !$ 诱动下转移的组成型表达的抗砷质粒 O7MTN! 。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性喜温硫杆菌 中，构建了冶金工程菌 （ ），接合转移频率为（ ） %#’!()*#++,- #+’,- %#’!()*#++,- #+’,- O7MTN! %L!!! U $ L212 V %$ H ! 。表明在大肠杆菌和喜温硫杆菌之间成功地建立了一个遗传转移系统。经检测，重组质粒在喜温硫杆菌中具 有较好的稳定性，在无选择压力条件下传代 次基本保持稳定（重组质粒保留 以上）。经抗砷性能检测，与野 $ 26 W 生菌相比，构建的喜温硫杆菌工程菌抗砷能力明显提高，从%$@@’(: X 提高到!@@’(: X。 关键词：抗砷基因，喜温硫杆菌，接合转移，极端嗜酸性自养细菌 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） S28 N $$$%6#$1 #$$ $$62$ 细菌氧化法是用细菌来促进硫化矿氧化的湿法 程菌株，以适应实际生产的需要。喜温硫杆菌自从 ［］ 6 冶金过程，同化学冶金相比较，有对环境污染小、耗 %11! 年首次报道以来 ，国外的大量工作集中在它 能低、浸矿成本低等优势，尤其对处理低品位矿石， 的生理学和在浸矿中的作用方面，未见有对其遗传 具有很大的潜力。现在国内的富矿越来越少，开采 改造方面的报道，国内关于喜温硫杆菌的研究开展 ［，］ 贫矿的任务显得日益重要，但是传统焙烧以及化学 比较晚，尚处于起步阶段% 。 方法都具有对环境污染大、设备要求高、提取率低和 本实验室从云南腾冲分离到一株中度嗜热嗜酸 生产成本高的缺点，因此细菌氧化法越来越广泛地 硫氧化杆菌Q9[