HPLC分离条件的优化的步骤以及定量计算公式的选择.pptVIP

HPLC分离条件的优化步骤以及定量计算公式的选择;;1. HPLC分离优化基本概念;1. HPLC分离优化基本概念; ;2.1、分离模式的选择;2.2色谱柱的选择;3.1 容量因子和死时间的测量; 1.由色谱柱的结构参数进行计算 t M = Lπr2 εT / F 式中，L为柱长，cm；r为柱内径半径，cm；F为流动相体积流速，cm3/s； εT 为总孔率，对全多孔固定相为0.84，对化学键和固定相、离子交换剂为0.75，对薄壳型固定相为0.42。 ;2.由色谱柱的操作参数进行计算 t M =ΦηL2/△pd p2 式中，Φ为阻抗因子；η为流动相的动力黏度；L为柱长； △p为柱压力降；d p为固定相粒径;4.液固色谱死时间 用RID（折光指数检测器）检测：若以正己烷与极性改性剂作流动相，可以正戊烷作探针测死时间。 用UVD（紫外吸收检测器）检测：可以苯、四氯乙烯或KNO3水溶液作探针测死时间;5.液液色谱死时间 用RID检测：可以重水（D2O）、重氢甲醇（CD3OH）作探针测死时间。 用UVD检测：反相可用NaCl、NaNO3、HNO3、HClO3、苯甲酸、苦味酸、尿嘧啶水溶液作探针测死时间，测量误差较大。正相可用四氯乙烯、四氟乙烯作探针测死时间。;3.2 色谱柱操作参数的选择;3.3 样品组分保留值和容量因子的选择; 对组成复杂、由具有宽范围k′值组分构成的混合物，需用梯度洗脱技术，才能使样品中每个组分都在最佳状态下洗脱出来。（采用梯度洗脱通常能将组分的k′值减小至原来的1/10~1/100，从而缩短了分析时间。）; 选定一种高效液相色谱方法时，很难将各组分间的分离度都调至最佳，只能使少数几对难分离物质对的分离度至少保持R=1.0。 R＜1.0，仅呈半峰处分离，则应通过改变流动相组成或改变流动相流速，调节分离度，尽可能使R=1.0，才能满足准确定量分析的要求。;调节流动相的pH值： 抑制样品组分的解离 增加组分在固定相上的保留 改善峰形 ，减轻或消除峰拖尾现象 ;3.分离条件的优化;4.定量计算公式的选择;4.定量计算公式的选择;4.定量计算公式的选择;4.定量计算公式的选择;4.定量计算公式的选择;4.定量计算公式的选择;参考文献： [1] 于世林. 高效液相色谱方法及应用[M]. 化学工业出版社,2005,4 [2] 张庆合. 高效液相色??实用手册[M]. 化学工业出版社,2005,4 [3] 傅若农. 色谱分析概论[M]. 化学工业出版社,2000,1 [4] 张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社，2004，7 [5] 汪正范. 色谱定性与定量[M]. 化学工业出版社,2007,9;