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老化皮肤胶原及弹性组织变化探究[摘要]目的：探讨光曝露情况及年龄因素对皮肤中弹性组织、Ⅰ/Ⅲ型胶原及基底膜Ⅳ型胶原的影响，进而探索皱纹形成的组织学原因。方法：对80例取自不同年龄志愿者的曝光部位(眶周/前额、面颊)及非曝光部位(腹部/臀部)的皮肤组织进行HE染色、weigert染色、苦味酸天狼猩红染色及免疫组化处理，采用显微形态观察和半定量分析。结果：各部位皮肤基底膜内Ⅳ型胶原的含量无差异；随着曝光时间增加，前额/眶周皮肤中Ⅰ型胶原减少率最大，弹性变性物质增加率最大。结论：前额/眶周皮肤的胶原显著减少和弹性变性物质明显增生，是该部位皮肤皱纹早发的重要原因。 [关键词]光老化；皱纹；胶原；弹性组织 [中图分类号]Q591.2　[文献标识码]A [文章编号]1008－6455(2007)06－0727－04 　 皮肤老化按其成因分为内源性和外源性。内源性皮肤老化主要是指随着年龄增长而出现的全身皮肤松弛和皮纹加深，是不可避免的。外源性皮肤老化主要是指光老化，即紫外线反复照射造成曝光部位的皮肤出现粗糙、干燥、皱纹深大等现象，是可以预防和避免的。老化皮肤影响容貌，功能受损，甚至对心理和自信构成阴影。其中，皱纹是老化最明显的外在表现，因此预防和延缓皱纹形成日益成为皮肤医学美容学关注的热点。 真皮组织学改变是皮肤外在特征的物质基础。本研究对比曝光和非曝光部位皮肤，探索皱纹早发的皮肤(前额和眶周皮肤)、皱纹晚发的皮肤(面颊皮肤)及非曝光皮肤(腹部和臀部皮肤)内胶原和弹性组织的差异。 1　材料和方法 1．1　标本来源及制备：正常皮肤标本共80例(男女不限，年龄为18～87岁)。清洁取材，10％甲醛液浸泡固定，石蜡包埋。 1．2　标本分组：①根据皮肤部位是否曝光及皱纹容易发生的时间分为：皱纹早发的曝光皮肤(包括眼周皮肤18例和前额皮肤14例)；皱纹晚发的曝光皮肤(面颊皮肤17例)；非曝光皮肤(包括腹部皮肤28例和臀部皮肤3例)；②根据年龄分为：青年组(18～39岁)皮肤48例；中年组(40～59岁)皮肤18例；老年组(60～87岁)皮肤14例。 1．3　主要试剂：鼠抗人CollagenⅣ抗体(武汉博士德BM0025)；SP－9002生物素标记山羊抗小鼠IgG(北京中杉)；Weigert氏液(间苯二酚一碱性品红液)(标准配制)；苦味酸天狼猩红染液(标准配制)。 1．4　主要操作步骤 1．4．1　常规HF染色，OlympusAX80显微图像摄取仪采图。 1．4．2　免疫组化SAB法染色，Leitz labor Lux12POLS显微图像摄取仪采图。问质和细胞浆出现棕黄或深棕色染色者为阳性结果。 1．4．3　苦味酸天狼猩红－偏振光法(Picrosirius－Polarization，PSP)：切片脱蜡脱水置于0.1％苦味酸天狼猩红染液染色；碘酸钠半氧化苏木素复染；脱水、透明、封片后置于偏振光显微镜下观察。亮黄，橙或红色粗状纤维为Ⅰ型胶原纤维。细长的绿色纤维为Ⅲ型胶原纤维。 1．4．4．　Weigert弹性组织染色，Leitz labor Lux12POLS显微图像摄取仪采图，蓝黑色为阳性结果。 1．5　图像分析 1．5．1　免疫组化分析：每张组织切片上随机选择3个基底膜视野，每个视野摄片l幅，每张切片共摄片3幅。Mediacy Image－ProPlus 4.5专业图像分析软件半定量每张摄片内Ⅳ型胶原的含量，每张切片结果取其均值。积分光密度(Integral OpticDensity，IOD)越大，阳性表达越多。 1．5．2　弹性纤维分析方法同上，半定量分析弹性组织的含量及其IOD的改变。 1．5．3　苦味酸天狼猩红染色分析方法同上，半定量分析Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量。 1．6　统计学处理：应用SPSS11.0统计软件，进行多组间单因素方差分(one－Way ANOVA)和两两组间的q检验。各年龄组间差异和各部位组间差异用非配对t检验。 2　定量分析结果 2．1　皮肤基底膜内Ⅳ型胶原含量：不同部位基底膜内Ⅳ型胶原含量相近，差异无显著性(P＞0.05)。不同年龄皮肤基底膜内Ⅳ型胶原含量相近，差异无显著性(P＞0.05)。 2．2　胶原纤维 2．2．1　Ⅰ型胶原含量(见图1.1～1.9)。 2．2．1．1　各部位皮肤的Ⅰ型胶原含量均随年龄增加而递减(P＜0.01)。与青年组相比(见图1.1～1.3)，老年组前额/眶周皮肤的胶原减少15.87％，面颊部位减少13.54％，(见图1.4～1.6)，腹/臀部位减少了9.58％(见图1.7～1.9)。 2．2．1．2　各年龄组的前额/眶周皮肤的Ⅰ型胶原含量均最少(见图1.1