红细胞对细菌天然免疫反应比较实验探究.docVIP

红细胞对细菌天然免疫反应比较实验探究摘 要 目的：比较红细胞对细菌的天然免疫能力。方法：将细菌（大肠杆菌等）加入红细胞悬液中，37℃水浴30分钟。结果：肿瘤患者红细胞对细菌（大肠杆菌等）的免疫粘附反应能力比正常人低（P＜0.01）。结论：红细胞对细菌有天然免疫反应。红细胞对细菌的天然免疫反应能力的测定在临床上有应用价值。 关键词 红细胞 天然免疫反应 细菌 资料与方法 红细胞来源：20名健康献血员（常州市中心血站）在当天献血时采集红细胞，其中男11例，女9例，年龄22～35岁。 肿瘤患者来自本院，为住院确诊的22例癌症患者，男12例，女10例，年龄29～68岁。包括肠胃道癌13例，肝癌2例，乳腺癌3例，肺癌1例，胰头癌1例，甲状腺癌1例，卵巢癌1例。 其他感染患者为本院住院确诊的11例严重感染患者，包括肺部感染2例，化脓性脑膜炎1例，产后败血症1例，病毒性脑炎1例，SLE伴有感染2例，大面积烧伤感染1例，肠伤寒1例，弥漫性腹膜炎1例，肝脓疡1例。 菌种为标准株，来源于上海质控中心实验室和上医大抗生素研究所，13种细菌（克雷菌，伤寒沙门菌，大肠杆菌，枸缘酸杆菌，表皮葡萄球菌，嗜麦芽卡他球菌，假单胞菌，腐生葡萄球菌，摩根菌，阴沟杆菌，八叠球菌）。伤寒杆菌L型，由本室诱导变异株[1]。 红细胞天然免疫粘附细菌能力测定法（花环法）：红细胞用新鲜生理盐水洗涤3次，并用生理盐水稀释制成1×108/ml红细胞悬液。细菌用浊度计比浊稀释1×108/ml菌液。把红细胞悬液和细菌悬液各等量，置洁净的试管中，37℃水浴30分钟，加入0.25%戌二醛0.025ml，轻轻摇匀，水平面涂片，吹干，甲醇固定，革兰染色，油镜计数200个红细胞，红细胞上粘附2个以上细菌为1个花环，计算红细胞花环率（也可称粘附率）。 结 果 20例健康献血员红细胞和22例癌症患者红细胞与13种细菌天然免疫粘附结果：癌症患者红细胞对各种细菌的直接天然免疫粘附能力都比献血员低（P＜0.01）。 20例健康献血员红细胞和22例癌症患者红细胞与伤寒杆菌及伤寒杆菌L型天然免疫粘附结果：癌症患者结果明显低于献血员（P＜0.01）[2]。 11例严重感染患者体内红细胞粘附细菌试管内实验结果：采用患者红细胞用生理盐水稀释成1×108/ml的悬液，未加任何细菌。37℃水浴30分钟，取0.25%戊二醛0.25ml加入0.05ml红细胞悬液中，水平面涂片，吹干，甲醇固定，革兰染色，油镜观察。结果发现5例患者红细胞上粘附革兰阳性球菌，2例粘附革兰阴性杆菌。 11例感染患者血培养分离出金黄色葡萄球菌4例，表葡萄球菌1例，不动杆菌1例，伤寒杆菌1例，阴性4例。 讨 论 1930年DNKE发现锥虫在抗血清及补体存在时可粘附到人类红细胞上。1953年钠尔逊发现人类红细胞与特异调理过的梅毒螺旋体及肺炎双球菌结合。1963年尼雪娥考证明这种免疫现象是通过人类红细胞膜C3受体实现的。1980年弗尔龙研究了CR1的性质，分子量190 000～250 000的膜糖蛋白，并且85%CR1在红细胞上。1981年美国生殖免疫学家西格尔在前人研究的基础上发现红细胞有多种免疫功能，红细胞可粘附胸腺细胞，提出了“红细胞免疫系统”的新概念。 红细胞在天然免疫中具有重要作用，有关研究已证明红细胞有天然免疫功能（即自然免疫功能），可参与对肿瘤细胞和细菌的天然（也称自然）免疫反应。 我们对健康献血员、癌症患者红细胞直接天然免疫粘附多种细菌进行实验研究，证明红细胞能直接免疫粘附细菌，并且具有粘附伤寒杆菌L型的功能。不用补体致敏细菌进行粘附更能证实红细胞具有识别细菌能力，并对其具有直接粘附作用。 20例健康献血员红细胞直接天然免疫粘附伤寒杆菌及L型和13种细菌粘附结果分别为11.0%、11.8%和12.0%，22例癌症患者红细胞粘附伤寒杆菌及L型和13种细菌粘附结果分别为6.5%、6.1%和5.7%，实验结果说明健康人红细胞和癌症患者的红细胞均具有直接天然免疫粘附细菌和L型的能力。从结果分析健康献血员和癌症患者红细胞直接天然免疫粘附细菌及L型的能力有显著差异（P＜0.01）。健康献血员红细胞直接天然免疫粘附细菌及L型的能力比癌症患者高1倍。由于癌症患者机体免疫功能低下，红细胞CR3的天然免疫功能也低，所以红细胞的直接天然免疫功能亦反映机体的天然免疫状况。 11例严重感染患者红细胞悬液直接孵育,观察体内红细胞能否直接天然免疫粘附，自身机体感染的细菌，结果与血培养结果相符。红细胞在体内能直接天然免疫粘附自身体内感染的细菌，其机理可能与细菌能旁路激活粘附C3b而被红细胞CR1免疫粘附有关。但也可能是红细胞上CR3直接免疫粘附细菌上脂多糖（LP