解毒利肺口服液对病毒性肺炎小鼠免疫功能的影响.docVIP

　　解毒利肺口服液对病毒性肺炎小鼠免疫功能的影响 ：石世德，周民伟，李建军，郑文岭 【关键词】 解毒利肺口服液 　　摘要：【目的】研究解毒利肺口服液(简称JLOL，主要由金银花、连翘、黄芩、川贝等组成)对感染病毒机体免疫系统的影响。【方法】60只小鼠随机分为5组：正常对照组、模型对照组、病毒唑组、JLOL大剂量组及JLOL小剂量组。运用流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染小鼠制成病毒性肺炎模型，观察JLOL对病毒性肺炎小鼠血浆中细胞因子白细胞介素1(IL１）、白细胞介素2(IL2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)水平的影响。【结果】模型对照组与正常对照组比较，IL1及IFNγ水平降低，TNFα水平升高(均Ｐ＜001)，IL2虽有降低趋势，但差异无显著性(Ｐ＞005)。用JLOL治疗后，血浆中IL2及IFNγ水平升高，TNFα水平降低(Ｐ＜005或Ｐ＜001)；IL１水平有升高趋势，但差异无显著性(Ｐ＞005)。【结论】该药能提高病毒性肺炎小鼠IL2及IFNγ水平从而增强机体抗病毒感染的免疫功能，并通过抑制TNFα的过量产生，减轻免疫性病理损害。 　　关键词：解毒利肺口服液/治疗应用；肺炎，病毒性/中药疗法；白细胞介素1/血液；白细胞介素2/血液；肿瘤坏死因子/血液； 干扰素Ⅱ型/血液 　　解毒利肺口服液(JLOL)是本院为防治传染性非典型肺炎而创的中药复方制剂。该药具有辛凉解表、清热解毒、宣肺止咳的作用，临床用于治疗病毒性呼吸道感染具有较好疗效，本实验观察了该药对流感病毒肺炎小鼠血浆中与病毒感染密切相关的细胞因子白细胞介素1(IL1)、白细胞介素2(IL2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)及干扰素γ(IFNγ)水平的影响，从分子水平探讨JLOL的药理作用机制。 　　1 材料与方法 　　11 材料 　　111 病毒 　　流感病毒鼠肺适应株(FM1)，由中国医学科学院病毒研究所提供。 　　112 动物 　　C57BL/6小鼠，雄性，5周龄；BALB/c小鼠，雄性，体重16～18g；昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体重18～22g，由广州军区广州总医院实验动物中心提供，合格证号为粤检证字第2002B020号。 　　113 细胞株 　　L929小鼠纤维母细胞瘤细胞株，由广州军区广州总医院医学实验科细胞室常规冻存、复苏及传代培养。 　　114 药物 　JLOL由广州军区总医院医学实验科研制，含生药量为1kg/L(广州军区卫生部制剂批准文号03LS0012)，主要由金银花、连翘、黄芩、川贝、桔梗、鱼腥草、知母、甘草等11味中药组成。药物制备：将其中的金银花、连翘提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；蒸馏后的药渣与其他药物混合加水煎煮3次，每次1h，合并煎液，滤过。滤液与上述水溶液合并，浓缩，待冷至室温，加乙醇使含量为65%(体积分数)，混匀，静置后，去上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为110～115(温度为90～95℃)，浓缩液再与挥发油合并，加入矫味剂，调节pH值至规定范围，再加水至1000mL，混匀，静置，滤过，灌装，灭菌，即得；病毒唑注射液，江苏制药厂生产，批号020105。 　　115 试剂与仪器 　　刀豆素A(ConA)、脂肪多糖(LPS)、萘替乙二胺、磺胺、植物血凝素(PHA)均为Sigma公司产品(美国)；放线菌素D(Serva公司产品)；2g/L结晶紫、10g/L SDS、RPMI 1640培养基均为GIBCO公司产品(美国)；噻唑蓝(MTT)为Fluka公司产品(瑞士)；酶标仪：BioRed 255型(美国)；CO２细胞培养箱RK I 1001 B型(日本)；96孔细胞培养板(NUNC，丹麦)。 　　12 方法 　　121 动物分组及给药 　　昆明种小鼠60只，随机分成5组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、病毒唑组(009g#12539;kg－１#12539;d－１)、JLOL大剂量组(50g#12539;kg－１#12539;d－１)和JLOL小剂量组(25g#12539;kg－１#12539;d－１)。除正常对照组外，其他各组在感染病毒前分别灌服生理盐水、病毒唑和大、小剂量的JLOL 2次，感染后灌胃12次，灌胃容量为每次05mL，每日2次。 　　122 动物感染方法及血浆制备 　　各组小鼠轻度乙醚麻醉后，正常对照组用生理盐水滴鼻，每只50μL，其余各组以同体积FM1病毒液感染，感染病毒量为24倍LD５０，于感染后第6天，摘眼球取血，肝素抗凝，分离血浆，置-20℃保存待测。 　　123 IL1测定 　　采用胸腺细胞法［１］。按常规以5周龄C57BL/6小鼠，制备胸腺单个细胞悬液，调整细胞浓度至1×１０１０／Ｌ。取50μL加入96孔板后，分别加入体积比为1