蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响.docVIP

　　蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响 ：杜永强， 白云， 赵大卓， 姜波， 苏云明 【摘要】 目的： 探讨蝙蝠葛酚性碱（phenolic alkaloids from Menispermum dauricum，PAMD）预处理对脑缺血后大脑皮质细胞凋亡蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)表达的影响。方法： 采用线栓阻塞大脑中动脉方法制备大鼠脑缺血模型，并用受试药物术前连续预处理模型大鼠7 d。采用免疫组织化学方法测定假手术组，模型组，PAMD高、中、低剂量组，尼莫地平、银杏叶片预处理组大鼠缺血后24，48，72 h大脑皮质中细胞凋亡相关蛋白PKB表达变化。结果： 行大脑中动脉闭塞后大鼠大脑皮质PKB均被诱导表达，PAMD预处理7 d后，缺血后各时间点大鼠大脑皮质PKB表达明显升高。结论： PAMD能明显促进缺血脑损伤后抑制细胞凋亡相关蛋白PKB表达水平，从而在缺血性脑损伤中起到神经保护作用。 【关键词】 脑缺血； 蝙蝠葛酚性碱； 细胞凋亡； 蛋白激酶B ［Abstract］ Objective: Study and explore the express of gene and protein of protein kinase B(PKB) about cerebral ischemia effects of phenolic alkaloids from Menispermum dauricum（PAMD）on cerebral ischemia in rats. Methods： In order to observe the neuroprotective effect of PAMD on cerebral ischemia, the rats ia iddle cerebral artery (MCA) and then ia. The effects of PAMD on protein expression of PKB munohistochemical method. Results： The PKB e after executed by PAMD for 7 days. Conclusion： PAMD promoted the express of cell apoptosis protein PKB ia injured and had protecting effect on cerebral ischemia. ［Key ia；phenolic alkaloids from Menispermum dauricum；cell apoptosis；protein kinase B 脑血管病（CVD）是中老年人的常见病、多发病、疑难病，以其高发病率、高致残率、高死亡率受到国内外重视，成为中西药物 治疗 研究的热点领域。脑血管疾病中，缺血性脑血管病（ICVD）占了大部分，严重危害着人类的健康。脑缺血后神经元的死亡包括坏死和凋亡两种方式，脑功能的损伤程度与缺血程度及时间呈正相关，严重缺血的中心区以坏死为主，周边区(半暗带)的迟发性神经元死亡(delayed neuronal death, DND)则以凋亡为主［1］。自1991年蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)被克隆以来，虽然PKB的研究工作己经展开，但仍有许多问题尚未阐明。PKB在细胞生长、代谢、凋亡中扮演了很重要的角色［2］。PKB研究的另一个方向就是以它作为分子基础，寻找治疗糖尿病、恶性肿瘤、神经退行性疾病的药物［3,4］。 蝙蝠葛酚性碱（phenolic alkaloids from Menispermum dauricum，PAMD）是从中药北豆根中提取的多种脂溶性生物碱的混合物，主要含有蝙蝠葛碱（dauricine，Dau）和蝙蝠葛苏林碱（daurisoline，DS），其他成分含量甚微。近年来，对PAMD的药理作用及其机制进行的大量研究，主要集中在对心血管系统的作用、对脑缺血及缺血再灌注损伤的保护作用、抗肿瘤等作用研究上。本研究建立大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型，通过观察PAMD对细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响来阐明其对ICVD的预防作用，为临床进一步阐明脑缺血损伤的机制和保护脑组织奠定基础，同时也为PAMD的新药开发及临床应用提供理论基础和实验依据。 1 材料与方法 1.1 药品及主要试剂 PAMD由黑龙江中医药大学药学院王栋教授提供，用时先以1 mol/L　HCl溶解后，再用1 mol/L　NaOH调pH值至中性，加蒸馏水至所需浓度。尼莫地平片(西安博爱制药有限公司，批号：国药准字；银杏叶片(唐山荣大药业有限公司，批号