TLC-UV法测定消白合剂中丹参素(C9H10O5)含量.docVIP

TLC-UV法测定消白合剂中丹参素(C9H10O5)含量指导：刘桂芳? 摘要：目的：建立消白合剂的定量方法。方法：采用TLC-UV法，对方中的丹参中的丹参素进行含量测定。结果：本法的精密度、稳定性、重现性和回收率均良好。可用于含有丹参类中药制剂的含量测定。? 关键词：丹参；丹参素；TLC-UV? 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2007）04-0814-02 消白合剂是辽宁中医药大学附属医院著名老中医的经验方，主要由党参、丹参、白鲜皮、当归等12味中药组成，具有滋补气血、益肝肾的作用，主治白癜风。鉴于方中丹参为其主药之一，丹参素为其活性成分之一，同时又是2000年版药典收载的对照品，因此，质量标准含量测定项下采用丹参素为定量指标，采用TLC-UV法对丹参中丹参素进行定量测定。结果表明，TLC-UV法测定丹参素钠的含量，方法快捷，准确可行。? 1丹参素紫外分光光度法测定条件的选择? 1.1丹参素的紫外吸收光谱精密称取丹参素钠11.3mg（与10mg丹参素相当），溶解于1.0mL1%醋酸溶液。精密量取5μL，置于5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，以甲醇为空白溶液，于UV-1100紫外可见分光光度计上扫描。? 结果表明，丹参素于波长281nm处具有最大吸收。? 1.2精密性试验精密吸取丹参素溶液（10mg/mL）10μL,置于5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，于波长281nm处连续5次测定其吸收度。结果见表1。? 1.3稳定性试验精密吸取丹参素溶液（10mg/mL）15μL，置于5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，于波长281nm处，测定0、1、2、3、4、5、6h的吸收度，结果见表2。? 1.4重复性试验精密吸取丹参素溶液（10mg/mL）10μL，共计5份，置于5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，于281nm处测定其吸收度。结果见表3。? 1.5丹参素标准曲线的测定精密量取丹参素溶液（10mg/mL）5、10、15、20、25及30μL，置于5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白溶液，于281nm处分别测定其吸收度。结果见表4。? 2丹参素薄层层析分离与测定条件的选择? 2.1丹参素的薄层层析取薄层板（10cm×20cm）,点加丹参素溶液10μL，冷风吹干，将薄层板置于贮有以氯仿―丙酮―甲酸（25∶10∶4）溶液为展开剂的层析缸中预饱和15min，展开，取出，晾干，至无甲酸味。喷以碱性异烟肼溶液，于105℃加热至猩红色斑点显色清晰。 刮下斑点，置具塞试管中，加1.0mol/L盐酸溶液5.0mL于超声波清洗器内，超声洗脱10min，离心，吸取上清液，测定其紫外吸收光谱图，结果与图1一致。? 2.2丹参素经薄层层析后回收率的测定精密吸取不同量丹参素溶液（10mg/mL）5.0~30μL，分别点于同一薄层板上，以氯仿―丙酮―甲酸（25∶10∶4）溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以碱性异烟肼溶液，于105℃加热至斑点显色清晰后刮取斑点，以1mol/L盐酸溶液5.0mL超声洗脱，于281nm处测定其吸收度。同时用空白展开的薄层板，经同法处理后作对照。? 根据标准曲线回归方程，算出丹参素经薄层层析后的回收率，结果如表3，平均回收率为（82.69±2.529）%，表中各点取均值（n=5）。回收曲线见图2。线性良好，相关系数r=0.9991。? 3消白合剂中丹参素的含量测定 ? 3.1供试品溶液的制备取本品溶液50mL，置水浴蒸干，残渣加无水乙醇20mL，置水浴上充分搅拌，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇4mL使溶解，作为供试品溶液。? 3.2对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。? 3.3阴性液的制备称取药材（除丹参）1/10处方量，加水150mL煎煮1h，滤过，浓缩至50mL，同上法制成阴性液溶液。? 3.4薄层层析常法铺板，105℃活化30min。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取6份上述供试品溶液各6μL、对照品溶液2μL及阴性液6μL，分别点于同一以0.2%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿―丙酮―甲酸（25∶10∶4）溶液为展开剂，展开，取出，晾干，至无甲酸味，喷以碱性异烟肼溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。经多次试验，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个猩红色斑点。阴性液无干扰，方法重复性好。? 刮下与对照品色谱对应位置处的猩红色斑点置具塞试管中，加入1mol/L盐酸溶液5.0mL，超声洗脱10min，离心，吸取上清液，于2