RP-HPLC测定血塞通片中人参皂苷Rg1及三七皂苷R1含量.docVIP

RP-HPLC测定血塞通片中人参皂苷Rg1及三七皂苷R1含量摘要：目的：应用反相高效液相色谱法测定血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1含量。方法：色谱柱：Shim－Pack VP－ODS(5μm，250ram×4.6mmI.D)，柱温27℃，流动相为乙腈－0.05％磷酸溶液(21:79)，检测波长203 nm，流速1.0mL/min。结果：人参皂苷Rg1和三七皂苷R1分别在0.167－9.994μg(r=0.9999)和0.485－9.704μg(r=0.9999)范围内线性关系良好。平均回收率分别为98.68％和98.68％。RSD分别为0.58％和0.79％。结论：本法操作简便、结果准确，重现性好，可用于血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量测定。 关键词：血塞通片；人参皂苷Rg1；三七皂苷R1；RP－HPLC 中图分类号：R285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1962－02 血塞通片为三七总皂苷制成的片。三七总皂苷是从中药材三七中提取的有效成分，其主要成分为三七皂苷R1，人参皂苷Rg1等。它具有多种的生理活性，临床用于治疗血液系统疾病、呼吸系统疾病、老年性心脑血管疾病等。原质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第17册，原标准采用紫外分光光度计比色法(加高氯酸一香荚兰醛冰醋酸比色)测定三七总皂苷的含量，其测定方法操作复杂、受温度、时间影响较大，重复性差。本文建立了反相高效液相色谱法同时测定制剂中人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量之和作为控制血塞通片的质量指标。 1 仪器与试药 日本岛津LC－2010 A高效液相色谱仪，自动进样系统：Lcsolution Version 1.11 SP1色谱数据工作站；日本岛津UV－2450紫外分光光度计；KQ－250B型超声波清洗器(功率：250W，频率：40KHz)。甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸(分析纯)；水为重蒸馏水；人参皂苷对照品Rg1，批号：110703－200322；三七皂苷R1批号：0745－200007，均由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用)。血塞通片(市售，批号050406规格：25mg)。 2　方法与结果 2．1　色谱条件　色谱柱：Shim－Pack VP－ODS(5μm，250mm×4.6mmI.D)，柱温27℃，流动相为乙腈－0.05％磷酸溶液(21:79)，检测波长203nm，流速1.0mL/min。柱温：27℃；检测波长：203nm。 2．2　对照品溶液的制备　精密称取三七皂苷R1对照品与人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg10.333mg、三七皂苷R10.485mg的溶液。 2．3　标准曲线的绘制　人参皂苷Rg1标准曲线的绘制：精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.333hng的对照品溶液。精密吸取浓度为0.3331mg/mL的人参皂苷Rg1对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成待测对照品溶液。精密吸取上述不同浓度对照品溶液各10μL，另取浓度为0.3331mg/mL对照品原溶液20、30μL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品溶液浓度(μg/mL)为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经线性回归，人参皂苷Rg1的回归方程为Y=4.93×106X－4.26×103，r=0.9999；人参皂苷Rg1在0.167－9.997μg范围内线性关系良好。三七皂苷R1标准曲线的绘制：精密称取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.4852mg/mL的对照品溶液。精密吸取浓度为0 4852mg的对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、8.0、10.0mL于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精密吸取上述不同浓度对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪中，另取浓度为0.4852mg/mL对照品原溶液20μL注入高效液相色谱仪，共同制成待测对照品溶液，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经线性回归，三七皂苷Rg1的回归方程为Y=3.06×106X+527.34，r=0.9999；三七皂苷R1在0.4852－9.704μg范围内线性关系良好。 2．4　供试品溶液的制备　精密称取本品0.04g，用甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，超声处理10min，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2．5　空白试验　按处方量制成缺三七总皂苷的阴性样品，并按供试液的制备方法制备阴性对照液，按上述色谱条件测定，从色谱图可