RNA干扰NRP2基因表达对胃癌细胞SGC7901裸鼠移植瘤的抑制作用.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（７）：２８３２ ? ＲＮＡ干扰ＮＲＰ２基因表达对胃癌细胞 ＳＧＣ７９０１ 裸鼠移植瘤的抑制作用  连海峰　吴小翎 　彭　阳 （重庆医科大学附属第二医院　重庆　４０００１０） 摘要　目的：探讨特异性抑制 ＮＲＰ２基因表达对人胃癌细胞 ＳＧＣ７９０１裸鼠移植瘤生长及淋巴管 新生的影响。方法：采用小ＲＮＡ干扰方法，构建 ｓｈＮＲＰ２质粒，稳定转染入 ＳＧＣ７９０１细胞株， Ｗｅｓｔｅｎｂｌｏｔ检测转染前后ＮＲＰ２蛋白的表达。建立人胃癌细胞ＳＧＣ７９０１裸鼠移植瘤模型，随机分 为ｓｈＮＲＰ２组（实验组）、ｓｈＣｏｎ组（ＨＫ阴性对照组）和正常对照组，观察移植瘤的生长情况。６周 后处死裸鼠，免疫组化检测ＮＲＰ２蛋白的表达及微淋巴管密度（Ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｄｅｎｓｉｔｙ，ＭＬＤ）。结果： 成功构建ｓｈＮＲＰ２质粒，与另两组比较，ｓｈＮＲＰ２组细胞ＮＲＰ２蛋白表达明显降低，且移植瘤组织生 长、ＮＲＰ２表达及ＭＬＤ明显受抑制。结论：抑制ＮＲＰ２基因的表达，可以抑制胃癌裸鼠移植瘤的生 长及淋巴管的形成，ＮＲＰ２基因有可能成为一个潜在的胃癌生物治疗靶点。 关键词　胃癌　ＮＲＰ２　ＲＮＡ干扰　移植瘤　淋巴管生成 中图分类号　Ｒ３６３．２ 　　Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎｓ（ＮＲＰｓ）为跨膜糖蛋白，首先证实为神经 素溶液均购自Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；人ＳＧＣ７９０１细胞株由重庆 导向因子ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎｓ的主要受体，近来有学者发现它是 ＴＭ 医科大学生命科学研究院提供；Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００、 血管内皮生长因子 ［１］ ＶＥＧＦ的非酪氨酸激酶受体 。新近 Ｇ４１８购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；兔抗人 ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ２抗体购 发现神经轴突导向分子ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎｓ３Ｆ（Ｓｅｍａ３Ｆ）的受体 于美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，鼠抗人Ｄ２４０（淋巴管内皮）单 Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ２（ＮＲＰ２）也在胚胎脉管发育中具有重要作用， 克隆抗体、ＳＰ９００２免疫组化染色试剂盒为北京中杉金 其中ＮＲＰ２与淋巴管发生密切相关，可能与肿瘤的淋巴 桥生物技术有限公司；由重庆医科大学动物实验中心 ［２］ 结转移相关 ，胃癌是最常见的一种消化道恶性肿瘤，而 提供１５只Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠：６周龄，体重 １８～２０ｇ，重庆医 淋巴结转移是胃癌的一个重要的生物学特性。以人胃癌 科大学ＳＰＦ级实验室饲养。 细胞ＳＧＣ７９０１作为研究对象，以ＮＲＰ２基因作为靶基因， １．２　方　法 将针对ＮＲＰ２基因ｓｉＲＮＡ真核表达载体稳定转染到人胃 １．２．１　细胞培养　将ＳＧＣ７９０１培养于含青、链霉素及 癌细胞ＳＧＣ７９０１中后建立裸鼠转移瘤模型，观察其成瘤 １０％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，３７℃、５％ＣＯ孵 ２ 能力及肿瘤的生长情况，同时检测各裸鼠移植瘤的微淋 箱内贴壁生长，每２～３天用０．２５％胰蛋白酶消化传 巴管密度（ＭＬＤ），初步探讨ＮＲＰ２在胃癌中的作用。 代，取对数生长期细胞用于实验。 １．２．２　ｓｈＲＮＡＮＲＰ２质粒表达载体的构建与鉴定　 １　材料与方法 根据 ＧｅｎＢａｎｋ中 ＮＲＰ２ｍＲＮＡ（ＮＭ＿２０１２７９、ＮＭ＿ １．