香蕉种苗的组培快繁技术规程`.docVIP

DNB44 ICS65：020.20 B 05 省质量技术监督局备案号：011—2001 DNB440500 05-2001 香蕉种苗的组培快繁技术规程 2001-08-28 发布 2001-08-28实施 广东省汕头市质量技术监督局 发布 前 言 本标准制定主要按产品特点和汕头市农业科学研究所的生产实践经验而定。 本标准按GB/T1.1-2000《标准化工作导则 第一部分：标准的结构和编写规定》进行编制。 本标准由汕头市质量技术监督局提出。 本标准由汕头市农业科学研究所起草。 本标准主要起草人：李军、许大熊、黄利发、朱饱卿、曾宝珰。 香蕉种苗的组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了香蕉种苗的快速繁育技术规程、试管苗假植培育项目。 本标准适用于香芽蕉类、大蕉类、龙芽蕉类及其它类型香蕉的试管苗生产、繁育及假植培育。 2 设施设备 拥有交通方便、环境清洁、空气干燥的实验室——化学实验室、洗涤室、灭菌室、接种室、培养室等；生产所需的生产设备——高压蒸汽灭菌器、超净工作台、电子天平、解剖镜、空调、培养架、加温器、培养瓶等，以及各类化学试剂；有可供品种试验的试验地、种苗假植大棚及种源圃（母本园）。 3 母本园 由无病虫危害、无病毒侵染的优良香蕉母株组成。母本园附近500m范围内不能有蚜虫传播病毒的作物，有50~100m的隔离区，并有良好的排灌设施。 4 种源的选取 4.1时间 取芽应选择香蕉开始生长的温暖、晴朗的天气，避免在冬季低温阴雨天气取芽。 4.2观察 取芽前要对母株的主要农艺性状：果穗形态、果梳特点、果指形状、假茎高度及色泽、大小、叶片着生情况、叶色等进行观察，确保保持原有品种特性或有所改良，可以作为种源。 4.3取芽 取芽时选择生长健壮的芽，挖芽应稍靠近母株，避免挖裂芽伤及生长点而造成浪费。吸芽取回后应3d内处理。 5 培养基的配制 5.1母液的配制 5.1.1基本培养基MS的母液配制 将MS中所含的化学成份按大量元素（NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4）、微量元素（KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O）、铁盐（FeSO4·7H2O、Na2EDTA·2H2O）、有机物（维生素类、肌醇、甘氨酸）等四大类分别用蒸溜水溶解后配制成1：10、1：1000、1：100、1：100的母液，装入容量瓶后置于冰箱中保存。 5.1.2生长激素的配制 将生产所需的细胞分裂素6-BA（6-苄基腺嘌呤）、Ad（腺嘌呤）及生长素NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚丁酸）用1mol/l HCl或酒精溶解，再用蒸溜水稀释后分别配制成200mg/l的母液，装入容量瓶中，置于冰箱保存。 5.2 培养基的配制 5.2.1配料 按培养基的配方及所需培养基的数量，分别吸取适量的基本培养基MS的大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液及所需的生长激素，加入称量好的蔗糖、琼脂以及其它需要的物质，如活性炭等，混合后倒入煮培养基的锅中，并加入少量的蒸溜水。 5.2.2加热 加热培养基至琼脂完全溶解。 5.2.3定容 用蒸溜水将培养基定容至所需体积，并用1mol/l NaOH溶液和1mol/l HCl溶液调节pH值。 5.2.4分装 趁热把煮好的培养基分装入培养瓶（ф7cm、h10cm）20～30ml，盖上培养瓶盖。分装时应不断搅拌，并不要把培养基沾附在瓶口。 5.2.5灭菌 将分装好的培养基放入高压灭菌器内，采用湿热空气灭菌法（灭菌压力0.11～0.14MPa，120～126℃、15～20min）进行灭菌。无菌水，接种工具（手术刀、镊子、垫纸等）也均采用此法灭菌。培养基高压灭菌取出后，放至室温至培养基凝结后即可使用。 6 外植体的获得 6.1材料的处理 6.1.1初处理 将吸芽外层苞片仔细剥去，经自来水冲洗干净后，保留顶芽和侧芽原基，切割成约2cm假茎、2cm直径的圆柱。 6.1.2灭菌 在超净工作台上将切好的吸芽先放入75%的乙醇溶液中浸泡30s后，用无菌水洗净，再放入0.1%HgCl2或5%次氯酸钠溶液中10~20min后，用无菌水冲洗5~8次。 6.1.3切割及接种 在超净工作台上将已灭菌的吸芽置于无菌垫纸上，用事先已灭菌的手术刀、镊子取吸芽中心大小约0.5~0.8cm3的材料，并将其均匀切成四小块，接种于事先准备好的诱导培养基中，每瓶一块。基部切口应插入培养基内。在整个材料处理过程中要动作迅速，减少暴露在空气中的时间，减少因褐变而导致诱导的失败。 6.2诱导培