epidemiologiekolorektálníkarcinom-ismu-masarykovauniverzita.doc

Masarykova Univerzita P?írodovědecká fakulta ústav biochemie Funk?ní analyzy vybranych mikroRNA na modelu buně?nych linií odvozenych od nádor? tlustého st?eva Bakalárská práca Brno 2010 Andrej Be??e Chcel by som po?akova? v?etkym, ktorí mi akymko?vek sp?sobom pomohli pri tejto bakalárskej práci. Moje po?akovanie patrí najm? vedúcemu práce, RNDr. Ond?ejovi Slabému, Ph.D., za odborné vedenie a cenné rady pri spracovaní zadanej témy. ?akujem i Mgr. Jarmile Navrátilovej, Ph.D. za pomoc pri práci v?laboratóriu. Osobitné po?akovanie patrí mojim rodi?om a mojim najbli??ím za ich podporu. ?estne prehlasujem, ?e som predlo?enú bakalársku prácu spracoval samostatne pod vedením RNDr. Ond?eja Slabého, Ph.D. a s?pou?itím uvedenej literatúry a??al?ích citovanych informa?nych zdrojov. V?Brne 13. 5. 2010 Andrej Be??e Obsah Zoznam pou?itych skratiek 4 1. úvod 6 2. Teoretická ?as? 7 2.1. Kolorektálny karcinóm 7 2.1.1. ?lenenie a?klasifikácia 7 2.1.2. Epidemiológia 8 2.1.3. Diagnostika 9 2.1.4. Lie?ba 9 2.2. Molekulárna patológia 10 2.2.1 APC 12 2.2.2 Wnt/β-katenín signálna dráha 12 2.2.3. p53 13 2.2.4. EGFR 13 2.3. miRNA 14 2.3.1. Biogenéza a?funkcia miRNA 15 2.3.2 miRNA ako onkogén a?nadorovy superessor 16 2.3.3. úloha miRNA v?signálny dráhach 19 2.3.4. miR-21 19 2.3.5. miRNA ako diagnostické a prediktívne a lie?ebné ciele 21 2.4. Real-time PCR 21 2.5. MTT test 23 3. Ciele 24 4. Praktická ?as? 25 4.1. Materiál a?metódy 25 4.1.1 Pou?ité chemikálie a?prístroje 25 4.1.2. Vysievanie a?kultivácia buniek 25 4.1.3. Príprava DLD1 26 4.1.4. Transfekcia 26 4.1.5. Izolácia RNA z?transfekovanych buniek 26 4.1.6. Reverzná transkripcia miRNA do cDNA 27 4.1.7. Real-time PCR 28 4.1.9. Koncepcia experimentu 29 4.1.10. MTT test 30 4.1.11. Test na apoptózu 30 4.1.12 Western blotting 31 5. Vysledky 32 5.1 Vplyv transfekcie anti-miR-21 na hladinu miR-21 32 5.2 Vplyv transfekcie anti-miR-21 na viabilitu buniek DLD1 33 5.3. Vplyv transfekcie anti-miR-21 na apoptózu buniek DLD1 pomoco