试验八巴氏小体.ppt

课程目录 实验一 植物种子萌发和根尖取材固定 实验二 植物染色体制片及有丝分裂的观察 实验三 减数分裂制片技术及蝗虫精巢细胞显微观察 实验四 果蝇培养、麻醉及雌雄鉴别 实验五 果蝇唾腺染色体制备 实验六 果蝇单因子杂交/伴性遗传 实验七 染色体组型分析 实验八 果蝇基因组DNA提取 实验九 人类巴氏小体的观察 实验十 果蝇单因子杂交/伴性遗传数据分析 实验十一 Hardy-Weinberg遗传平衡定律的检验 实验十二 人类性状特征的遗传分析 实验九 人类巴氏小体的观察 什么是巴氏小体？ 巴氏小体的研究历史 1949年 加拿大学者Barr在雌猫神经原细胞核 中发现。 1955年Barr在女性口腔细胞中发现Barr body。 1959年人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏 小体的研究联系起来。 1971年Barr body被命名为x染色质。 食管癌病人巴氏小体出现率低于10％； 正常人细胞出现率为20－45％。 主要内容 一 实验目的 二 实验原理 （掌握） 三 实验材料 四 实验仪器及用具 五 药品和试剂 六 实验步骤 （理解） 七 作业 一、 实验目的 1 通过实验学会巴氏小体检查方法，掌握观察与鉴别X染色质的简易方法； 2 了解人类男女性别性染色体的功能差异；并为了解人体染色体的畸变与疾病提供参考条件. 性别分化 胚胎发育早期未分化的性腺是中性的。 雌性体细胞中1条X染色体为何失活而凝缩成巴氏小体？ 从X、Y染色体自身的特点来考虑…… 基因的剂量补偿效应【重点】 雌性xx两条染色体上基因剂量有2份，失活1份，使x连锁性状的表现在雌雄个体间无差异。 在失活的x染色体上x染色质并不缺失，其上的某些基因如xg血型基因、类固醇硫酸酯基因并不失活。 Lyon假说【重点】 雌性动物体细胞X染色体只有一条是有活性个的，那么雌雄个体X染色体上的基因效果相当 X染色体的失活是随机的，即雌性动物的染色体角度看是嵌合体 失活发生在胚胎发育的早期，已失活细胞分裂产生的细胞群遗传结构相同。 雌性动物伴性基因的作用产生嵌合体 体细胞间期Barr是小体的检查 临床意义在于： 1 胎儿性别鉴定：从胎儿羊水中取得脱落的细 胞检查，如有巴氏小体，胎儿为女性，如果 细胞中无巴氏小体，胎儿为男性。 2 成人性别鉴定：变性男运动员参加女子项目，可通 过检查其白细胞中有无巴氏小体而确定其性别。 3 性别畸形的判断：是否缺失或者多出巴氏小体。 三、实验材料 男、女性口腔颊部粘膜细胞。 四、实验仪器及用具 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签，离心管 五、药品和试剂 Giemsa染液，固定液， 5 mol/L HCl，低渗液 六、实验步骤 （一）直接涂片法： （每组2-3张女生口腔细胞涂片,1张男生口腔细胞涂片。） 1 涂片：受检者用自来水漱口，用牙签轻轻刮取口腔上皮细胞（腮 帮子处），将刮取物均匀涂布于载玻片上，晾干。 2 固定：将涂片放入95％的乙醇中固定30 min，取出晾干。 3 水解：将涂片放入5 mol HCl中室温下水解10min，自来水缓缓冲 洗。 4 染色：用Gimsa染液染色8-10分钟，勿干燥，用水冲洗后晾干镜检。 5 镜检：从低倍镜到高倍镜依次观察。　　 （二）滴片法： 1取材：受检者用自来水漱口，用牙签轻轻刮取口腔上 皮细胞，将刮取物涮于装有1ml生理盐水的离心 管中。 2离心：离心10分钟（5000转/分），弃上清液。 3低渗：加1ml低渗液混匀，37度低渗6分钟，离心10分 钟，弃上清液。 4固定：加固定液95％的乙醇1ml，室温固定10分钟，离心， 弃上清。 5滴片：加200ul固定液与沉淀物混成细胞悬液，用滴管 吸取细胞悬液，滴于洁净载玻片上，晾干。 6水解：5mol HCl水解10分钟。自来水冲洗。 7染色：Giemsa染色8分钟，冲去染液，干后镜检。　 直接涂片法操作简单，但口腔上皮细胞不易分散，细胞常重叠，而且标本上涂大量细胞才能满足计数的需要。 滴片法稍繁琐，离心收集细胞较难，但细胞分散均匀，细胞经低渗后核膜膨胀，巴氏小体增大，利于辨认。 七、作业： 1.分别观察50个男、女性可数的细胞，计算各　自的巴氏小体细胞所占的百分比。 2.在观察中画出2～3个典型细胞，标明巴氏小体　的部位。 思考题： 1 男性没有巴氏小体的理论基础。 2 男变女的变性手术后，该女性有无巴氏小体？ 3 性别畸形的染色体模式可能有几种？ * *