碱性磷酸酶活性检测试剂盒.PDFVIP

Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: 碱性磷酸酶活性检测试剂盒 I. 产品信息 目 录 号: AP00 11, AP0012, AP00 13, AP00 14 规 格: 100T, 200T, 500T, 1000T 保 存: 2 - 8℃ 效 期: 一年 II. 产品简介 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)在碱性环境中可催化水解磷酸酯。碱性磷酸酶的表达水平和活性变 化与肝脏和骨骼的很多病理状态有关。联科生物的碱性磷酸酶活性检测试剂盒以 4-硝基苯磷酸盐(p NPP) 为底物，可方便、快捷、灵敏地检测哺乳动物的血清及其它生物样品中的碱性磷酸酶活性。 III. 试剂盒组分 AP0011 AP00 12 AP00 13 AP00 14 规 储存条件 组分 格 100T 200T 500T 1000T 检测缓冲液 15 ml 30 ml 75 ml 150 ml 2 - 8℃ 显色底物 5 ml 10 ml 15 ml 50 ml 2 - 8℃避光 p -nitrophenol 40 μl 80 μl 200 μl 400 μl 2 - 8℃避光 溶液(10 mM) 终止液 12 ml 25 ml 60 ml 120 ml 2 - 8℃ IV. 使用方法 1. 试剂准备：取出所有试剂(包括检测样品)，恢复至室温。 标准品工作液：取15 μl p -nitrophenol 溶液(10 mM)，用检测缓冲液稀释至0.3 ml ，最终浓度为0.5 mM 。 2. 检测方案参考如下。标准品的用量分别为2 、4 、8、16、24 、32 和40 μl，推荐设两个重复。样品通常 加50 μl，如样品中的碱性磷酸酶活性过高，可减少样品用量或适当稀释后。为消除有色样本本身颜色 的影响，需设立样品对照孔，即加入样本，以检测缓冲液代替显色底物的对照。 标准品(μl) 样品(μl) 空白对照(μl) 检测缓冲液 100 - x 50 - y 50 显色底物 — 50 50 样品 — y — 标准品工作液 x — — 3. 加完所有样品后，在微孔板震荡器上震荡混匀数十秒。37℃避光孵育5 - 10 分钟。若待测样品中碱性 磷酸酶活性较低，可适当延长孵育时间至30 分钟。 4. 每孔加入100 μl终止液终止反应。 5. 在405 nm或400 - 415 nm范围内检测吸光度。如不能立即测定，可在数小时内完成测定，所显现的黄色 在数小时内稳定。 6. 结果计算：将标准品孔的OD值减去空白对照孔的OD值，校准后的标准品孔OD值与对应的p -nitrophenol 浓度建立标准曲线。样品孔的OD值减去样品对照孔的OD值，校准后的样品OD值代入标准曲线，计算 p -nitrophenol浓度。 碱性磷酸酶活性(U/ml) = A/V/T 。其中A为样品中产生的p -nitrophenol量(μmol) ；V为样品体积(ml) ；T为 反应时间(min) 。 7. 碱性磷酸酶活性单位的定义：在pH9.8 的