干旱胁迫下对小麦幼苗理化的影响.docVIP

干旱胁迫下对小麦幼苗理化的影响 摘要 干旱是制约植物生长发育的主要逆境因素。以生长7天并干旱5天的小麦幼苗作原料，研究探讨了干旱对其生理生化的影响。结果表明：在干旱胁迫下，小麦体内的各项指标都有明显变化，如：pro、POD、PPO、MDA、H2O2 、GSH等。 关键词 干旱胁迫、小麦、pro，POD，PPO，MDA，H2O2 ，GSH 水循环与水资源分配格局的改变导致干旱半干旱区域不断扩散, 干旱环境不断恶化。植物叶片光合生理过程不仅是植物生长最为基本的过程, 而且对环境变化极为敏感。干旱常常被认为是自然条件下限制光合作用, 影响植物生产力的最重要因子之一【1】。2010年以来干旱不断，西南地区干旱范围不断扩大，逐步从云南扩展到四川、贵州、广西西部等地，受灾人数超过5000万人。农作物受害270万亩，其中重旱65万亩、干枯9万亩、水田缺水230万亩、旱地缺墒150万亩农作物受灾面积51.1万公顷，成灾面积24.8公顷，绝收面积5.7万公顷3000多万亩农作物受灾，小春作物基本绝收。 材料与方法 （一）、材料、试剂、仪器 1、材料：干旱胁迫下处理的小麦幼苗。 2、试剂：0.1% HgCl2 ，TTC，3%磺基水杨酸（SSA），冰乙酸，茚三酮，PBS(pH=7.8) ，0.6%TBA（用0.6% TCA配制）， PBS (pH=6.8，内含1mMHA)，0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v) H2SO4配制] ，PBS, （pH=5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP）， POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解），PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）5%三氯乙酸，PBS (pH=7.7) ，4 mM DTNB (用0.1M pH=6.8PBS现配)。 3、仪器：分光光度仪，离心机，试管，微量加样器，研钵等。 （二）、方法 1、Pro: 脯氨酸含量的测定采用磺基水杨酸法 。 （1）Pro的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 （2）测定：上清液各2 mL →分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂→煮沸15 min→冷却后→5000 rpm离心10 min（若没沉淀可略此步骤） →分别测定A520 （3）计算：Pro content=A520/(E *W*L)*V显*V总/V(mmol.g-1FW) 2、抗氧化酶（POD、POP） （1）抗氧化酶的提取：分别取0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨　→转入离心管中→用2 ml提取液洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。 　 （2）POD测定：取POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）3.00 ml，加入酶液100 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应3 min时的A470。 （3）PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.8 ml，加入酶液0.2 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应 2 min时的A410。 以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U）。 （4）计算： POD activities = A470/(E *W*t)*V显*V总/V用(mmol.g-1FWmin-1) PPO activities = A410/(0.01 *W*t)*V总/V用(U.g-1FW) 3、GSH (1)GSH的提取：分别取0.5 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 5% TCA洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 (2)测定：上清液各1 mL → 分别加入1 mL0.1M PBS (pH=7.7) → 0.5 mL 4 mM DTNB (用0.1M pH6.8PBS现配，空白用此PBS代替) → 25 ℃5 min→测定A412。 （3）计算： GSH content= A412/(E *W*L)*V显*V总/V用(mmol.g-1FW) 4、H2O2 (1)H2O2提取：分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 mL 50 mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)和少许石英砂→