HPLC-ICP-MS联用技术-李柏.ppt

中国科学院高能物理所核分析室 利用HPLC-ICP-MS研究生物样品中的微量元素 喻宏伟 王萌 李 柏 主要内容 反相离子对色谱与电感偶合等离子体质谱联用 生物样品中Se的种态研究 生物样品中无机和甲基汞的测定 排阻色谱与电感偶合等离子体质谱联用 生物样品中金属蛋白测定 RP-IP(Se) 引言 硒是一种重要的人体必需微量元素，硒的生物功能与其化学形态和含量密切相关，因此要全面研究硒的生物学意义，种态分析十分必要。 RP-IP(Se) 引言 硒在生物和环境样品中含量极低，所以对分析的灵敏度和精确度的要求很高，联用技术被认为是进行化学种态分析 的有效手段，其中高效液相色谱（HPLC）与电感耦合等离子质谱（ICP-MS）联用作为一种高灵敏的元素种态分析方法得到广泛的应用。 RP-IP(Se) 引言 ICP-MS因其超高的灵敏度成为元素选择性分析的有效手段，而且液相色谱和ICP-MS联用在具备标准物质的情况下，对已知结构的硒化合物有很好的分析效果。 仪器和方法 试剂 　１．标准物质 　　 硒酸钠（Na2SeO4）　高纯　Alfa Aesar公司 　　亚硒酸钠（Na2SeO3）分析　北京中联化工厂 　　硒代胱氨酸（selenocystine, SeCys） 　　硒代胱胺（selenocystamine，SeCM） 　　硒代蛋氨酸（selenomethionine, SeMet）Sigma公司 　 硒代尿素(Selenourea，SeUr) 　　　　　Fluka公司 　　三甲基硒离子（Tri-methyl Selenonium iodide，TmSeI）(本实验室合成)　 　　　 　　　 仪器和方法 试剂 2. 流动相甲醇 色谱纯 天津四友 离子对试剂 七氟丁酸 Fluka公司 所有溶液均用18.2MΩ超纯水配置,并用 0.22u微孔滤膜过滤 仪器和方法 色谱系统: Waters 626 非金属流路四元泵 Waters 600S 控制器 Waters 2487 紫外检测器 质谱系统: Thermo Elemental X7 系统连接: 色谱和质谱连接采用PEEK管直接连接,利用色谱 手动进样器触发做为质谱收集开始. 仪器和方法 仪器条件 HPLC： Waters 5μm Symmetry Shield RP18反相柱（3.9×150 mm） Symmetry Shield RP18保护柱（3.9×20 mm） 流动相 0.1％ HFBA，含甲醇0.3 ％和2 ％（v/v） 流速 1.0 ml/min 进样量 50 μL 柱 温，室温， ICP-MS： 射 频 功 率 1200 W 采样深度 100 mm 冷却气流速 13.0 L/min 驻留时间 500 ms 辅助氩气流速 0.8 L/min 测量同位素 78Se，80Se，82Se 雾室载气流速，0.8 L/min 分析时间 1800S CCT模式： 氦氢混合气组成，He-H2 7.28 ％ H2（v/v） 氦氢混合气流速， 7.5 ml/min 仪器和方法 样品制备: 人肝细胞胞质溶液通过匀浆,差速离心获得. 存于-70度深低温冰箱.分析前通过离心浓缩装置截取分子量小于3000的组分用于分析. 采自自愿健康人血清除去高分子量组分后进行分析测量. 健康人尿样用色谱流动相稀释后分析测量. 分析用的流动相、样品均用0.22u微孔滤膜过滤. 结果和讨论 CCT技术用于分析测量: 不同测量元素之间灵敏度比较 结果和讨论 CCT技术