利用VIGS技术研究草莓FaMYB5的功能.pdfVIP

园艺学报，2017 ，44 (1) ：33 –42. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0346；http ：//www. ahs. ac. cn 33 利用 VIGS 技术研究草莓 FaMYB5 的功能 * 王 玲，汤浩茹 ，王小蓉，陈 清，江雷雨，林源秀 （四川农业大学园艺学院，成都 611130 ） 摘 要：以‘丰香’草莓（Fragaria × ananassa ‘Toyonaka ’）为材料，采用病毒诱导的基因沉默技术 （Virus-induced Gene Silencing ，VIGS ）对果实中类黄酮化合物代谢相关转录因子基因 FaMYB5 进行沉默， 并对沉默后果实类黄酮化合物代谢途径相关的结构基因和其他转录因子基因表达量进行半定量 RT-PCR 及 RT-qPCR 分析。并分别采用 HPLC 和香草醛—硫酸比色法对沉默后果实中花青素苷和原花青素含量进 行测定。成功构建了 pTRV2-FaMYB5 的 VIGS 沉默载体，并建立了草莓果实 VIGS 沉默体系，FaMYB5 基因沉默效率达 60% ；FaMYB5 基因沉默处理与阴性对照相比，草莓类黄酮化合物代谢途径相关结构基因 和转录因子表达量均发生改变，其中 FaMYB9 、FaLAR 、FaDFR 、FaANR 表达量显著增加，从而导致果 实中原花青素含量增加；而花青素合成相关基因 FaANS 的表达量减少 1/2，FaMYB10 表达量变化并不显 著。此外，bHLH 家族的转录因子基因 FabHLH3 和 FabHLH3Δ 随着FaMYB5 的沉默表达量显著下降，而 FaGL3 显著升高。结果进一步证明 FaMYB5 转录因子对草莓类黄酮化合物代谢途径中的原花青素合成途 径起负调控作用。 关键词：草莓；VIGS ；FaMYB5 ；负调控类黄酮代谢 中图分类号：S 668.4 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2017 ）01-0033-10 Virus-induced Gene Silencing as a Tool for FaMYB5 Gene Functional Studies in Strawberry * WANG Ling ，TANG Haoru ，WANG Xiaorong ，CHEN Qing，JIANG Leiyu ，and LIN Yuanxiu （College of Horticulture，Sichuan Agricultural University ，Chengdu 611130，China） Abstract ：In the present study ，using strawberry cultivar ‘Toyonaka ’（Fragaria × ananassa ） as plant materials ，we silenced the gene encoding FaMYB5 transcription factor ，which was imparted in flavonoid metabolism in fruits of strawberry by using Virus-induced gene silencing （VIGS ）technology. After silencing of FaMYB5 ，the expression level of other important genes involved in flavonoid metabolic pathway was detected by semi-quantatitive PCR and RT-qPCR. Meanwhile ，in order to fully investigate the role of FaMYB5 in regulating