大肠杆菌！#！耐乙酸突变株的选育及其代谢特性研究.PDFVIP

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 ’( )! /’ )! 年 月 #$$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-. #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 大肠杆菌!#!耐乙酸突变株的选育及其代谢特性研究 朱才庆 叶 勤 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海 #$$#C ） 摘 要：大肠杆菌DE5 是基因工程常用的宿主菌之一，但由于对代谢副产物乙酸十分敏感， ! 影响外源基因的表达效率。为了提高 ! ) #$% DE5 乙酸耐受力，采用2$ F’ 诱变结合连续培 ! 养，逐步提高稀释率和乙酸钠选择压力，于含乙酸钠平板进一步筛选，得到5 株对乙酸耐受能 力显著增强的突变菌株，具有良好的遗传稳定性，其中D*46 显示最强的耐受性能。D*46 与 相比，在复合培养基 和 中菌体浓度分别提高 和 ，最大比生长速率分 DE5! GHI GHI#J 4C K 5 K 别提高 和 ，产乙酸分别减少为 和 ；在基本培养基中的细胞浓度提高 倍， %K #C K 2 K 56 K # L! 在含4$,M N 乙酸钠培养基中达到的细胞浓度与不加乙酸钠DE5 的细胞浓度相当。 ! 关键词：大肠杆菌，菌种选育，连续培养，乙酸耐受性 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） O6 L * $$$432#$6 #$$ $!3$!2$3$2 大肠杆菌（ ）是表达重组蛋白最常用的宿主菌，已应用于许多具有重要 !’()%’%* #$% 药用价值蛋白的生产。大肠杆菌表达系统具有许多优点，如生长快、培养成本低廉、遗传 背景清楚和易实现高密度培养等。然而在培养过程中易发生副产物乙酸的生成和积累，不 ［］ 但造成碳源浪费，而且抑制菌体生长及外源基因的表达，影响了大肠杆菌的生产能力4 。 为了解决乙酸抑制问题，目前的研究主要集中在：（4）培养基优化及发酵过程控制，如 ［］ ［］ ［］ # ! 采用一些产乙酸少的碳源 、补料分批培养 、计算机控制流加碳源 、发酵过程与乙酸 ［，］ ［］ 分离耦合等5 2 C ；（ ）选育磷酸转乙酰酶（ ）或乙酸激酶（ ）缺失突变株 ；（）代谢工 # H0* *FP