选3-1-2基因工程的基本操作程序.pptVIP

例：多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是（ ） A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 59．若将上图所示X－1、X－2、X－3、X－4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 2、将目的基因导入动物细胞 （1）一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是 ____________________________________。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。 【解析】质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入DNA连接酶。 【解析】质粒上的抗性基因为标记基因，用于鉴别和筛选含有重组质粒的受体细胞。 【解析】将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，含有重组质粒的个体才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作为唯一碳源的培养基进行培养受体细胞，含有重组质粒的细胞才能存活，不含有重组质粒的因不能获得碳源而死亡，从而达到筛选目的。 天津卷7.（14分）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、用Ca2+处理法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如右图。 45. 基因1～8中有一个是控制核糖体蛋白质合成的基因，则该基因最有可能是基因 。 46. 图所示细胞中功能最为近似的是细胞 。 A.1与6 B.2与5 C.2与3 D.4与5 47. 判断图中细胞功能近似程度的依据是 。 49. 右上图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是 。 A. Hind Ⅲ B. EcoR I C. Eco B D. Pst I （３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即　　　　DNA连接酶和　　　　DNA连接酶。 （2012全国卷新课标版）40．现代生物科技专题（15分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题： （４）反转录作用的模板是　 　　，产物是　　 　。若要在体外获得大量反转录产物，常采用_________________________技术。 （５）基因工程中除质粒外，　　　　　和 ______________________也可作为运载体。 （６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因 是__________________________________ 　 【解析】过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸内切酶，简称限制酶，写其他的不得分）；启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶结合和识别的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。 【解析】过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制后可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里