有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型的适用性研究-斑马鱼药物筛选平台.PDF

238 实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative Medicine Aug.2008,28(4) 有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型的适用性研究 王思锋,王希敏,侯海荣,刘可春,韩利文,陈锡强,王 雪 (山东省科学院生物研究所山东省科学院药物筛选研发平台，济南 250014) [摘要]目的 研究二甲基亚砜、丙酮、甲醇、异丙醇四种有机溶剂在斑马鱼模型抗血管生成药物 筛选中作为助溶剂的适用性。方法 以每种有机溶剂系列浓度处理发育12 h或24 h斑马鱼胚胎， 到发育72 h观察胚胎血管生成、畸形、死亡状况，计数体节间血管，并计算畸形率和死亡率。 结果 有机溶剂中存活的斑马鱼胚胎体节间血管形态和数量正常，与对照一致。0.1%浓度二甲 基亚砜、丙酮和1%浓度甲醇中斑马鱼胚胎无畸形和死亡状况，但随着浓度上升畸形率和死亡率 均显著高于对照。0.1%浓度异丙醇中斑马鱼胚胎的畸形率和死亡率已显著高于对照。结论 作 为助溶剂，二甲基亚砜、丙酮适宜浓度为≤0.1%，甲醇适宜浓度为≤1%，异丙醇不适合用于斑 马鱼模型抗血管生成药物筛选。 [关键词]斑马鱼；血管生成；药物筛选；模型；助溶剂 [中图分类号] R965.1文献标识码] A[文章编号]1004-8448(2008)04-0238-05[ 斑马鱼(Danio rerio)是一种发现于印度和巴基 影响,探讨了乙醇作为斑马鱼模型抗肿瘤药物筛选中 [6] 斯坦水域的热带鱼，因体侧有银蓝色的纵向条纹而 有机助溶剂的适用性 ,而目前尚无其他四种有机溶 得名，具有养殖和繁殖容易，胚胎透明、体外发 剂在此方面的研究报道。因此本文研究了不同浓度 育而且速度快等生物学特点。其早期胚胎发育 二甲基亚砜、丙酮、甲醇、异丙醇对斑马鱼胚胎 12～24 h，躯干部体节间的血管开始由背部的动脉 的血管生成、致畸、致死等作用,为斑马鱼模型抗 [1] 肿瘤药物筛选中有机助溶剂的选择提供参考资料。 出芽形成于相邻体节之间 。此血管生成过程与肿 瘤血管生成模式相近，因此斑马鱼已被认为是一种 较理想的筛选抑制血管生成类抗肿瘤药物的活体动 1 材料与方法 [2, 3] 物模型 。筛选药物时，施药方式简单，将待 筛样品溶于水中，通过扩散或吸收作用进入胚胎发 1.1实验动物 挥作用。 实验所用斑马鱼为AB系普通斑马鱼和血管荧 药物筛选中常常碰到许多水溶性较差的待筛样 光转基因斑马鱼(VEGFR2: GFP)，取自美国哈佛大 [7] 品，需借助有机助溶剂才能溶解。一些学者研究 学医学院。斑马鱼的养殖和繁殖参照Westerfield 了多种有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒作用，便于在 的方法。喂养时，照明14 h/黑暗10 h交替进行， [4, 5] 雌雄斑马鱼分开喂养，定时喂以人工颗粒状饵料和 抗肿瘤药物筛选时选择合适的助溶剂 。其中二 甲基亚砜、丙酮、乙醇、甲醇、异丙醇与水互 卤虫无节幼体(Artemia nauplii)。采卵时，傍晚将 溶性较好,本文作者研究了乙醇对斑马鱼胚胎发育的 健康性成熟的斑马鱼，按雌雄1/1或1/2的比例放 入交配缸内(普通型和转基因型杂交)，次日清晨获 [收稿日期] 2008-03-31 得受精卵。对受精卵进行消毒和清洗后，移入斑 [基金项目]山东省科技攻关项目(2006GG3202038) 马鱼胚胎培养用水中，28℃下控光培养 。 [作