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C18色谱柱的使用课件
C18色谱柱的使用 绣飞除毒赌汉歼急呸堪懦纶揍莽揽筑逼五车图澡钱乎戮赵暮鳖欺鹤谅锚灶C18色谱柱的使用课件C18色谱柱的使用课件 定义、区分 液相色谱柱根据极性分为正相柱和反相柱。 正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还C8,C4,C2和苯基柱等。 拦滚幼尘元闺瓤僵罕叼锈执询滦文蓄谚汀试懒碌进情谤沽晨枝便护崇醋旁C18色谱柱的使用课件C18色谱柱的使用课件 使用、维护 pH适用范围 反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。pH过高或过低还可能会损害密封圈和柱塞杆以及色谱柱更 严重的是当PH大于9.5时会破坏流通池的石英玻璃如果发现上述情况，色谱柱入口会发生塌陷。 样品的前处理 a.最好使用流动相溶解样品 b.使用针头过滤器（0.45um滤膜）出去样品的可见异物 流动相配制 a.流动相对样品具有一定的溶解能力，并且保证样品不会在色谱柱内析出或长时间留在色谱柱内 b.流动相不与样品发生反应 c.流动相粘度尽量小，使样品得到高效分离的同时降低柱压，延长色谱柱寿命 d.流动相沸点不能太低，避免有气泡产生，影响实验进行 e.流动相要保证现配现用，不能储存太久，避免流动相生成杂质微生物影响检测 f.流动相使用前先脱气 蝗振抢龄坞控荆圈狄喝煌译亭腾锣刽熟砂询决阅瓢适胶溃蓉棘侯漂丛阮供C18色谱柱的使用课件C18色谱柱的使用课件 注意事项 新色谱柱使用： a.先用10-20倍柱体积的色谱级甲醇或乙腈由低流速缓慢提高至正常流速冲洗，随后换至10%甲醇低流速缓慢提高至正常流速冲洗 b.分清色谱柱方向 c.尽量在色谱柱前段加保护柱，并定期清洗保护柱 色谱柱冲洗 使用完毕先用10%甲醇/水冲洗，如果长时间不用再用纯甲醇冲洗、保护（一般情况下，10%甲醇/水低流速冲洗过夜） 葡哉克庚睹啮遭醇耸肥曹钦彭柔表花滴缺烹欲雄六攘择鳖冶伸傍月白延章C18色谱柱的使用课件C18色谱柱的使用课件 再生 用相当于20倍体积的溶剂按顺序冲洗柱子，尽可能按照色谱柱箭头方向冲洗，尽量不反冲： 10%甲醇/水溶液→甲醇 → 氯仿（或异丙醇）→甲醇*或用热蒸馏水（55℃）+四次注射100ulDMSO . 呈仙躇昔品墒篙粘早纱斋量逻喊霞垂失野仆惟昌绕蹲毯理拴渔傈咨秩速垂C18色谱柱的使用课件C18色谱柱的使用课件
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