ARMS引物扩增受阻突变体系PCR技术.pdfVIP

　　　　　 ·5 14 · 《生命的化学》2004 年 24 卷 6 期 ●Technique s and Metho d s CHEMISTRY OF LIFE 2004 , 24 (6) ( ) 文章编号 2004 　　 一种 SNP 检测新方法 : 四引物扩增受阻突变体系 PCR 技术 1 1 1 ,2 管 　峰 　艾君涛 　杨利国 ( 1 2 ) 南京农业大学动物繁育研究所 , 南京 210095 ; 华中农业大学动物科技学院 , 武汉 430070 摘要 : 详细介绍四引物扩增受阻突变体系 PCR 技术的原理和分析方法 ,并简单介绍其在检测单核苷酸多态性中的应 用 ,为该技术在医学和分子生物学等领域中的推广应用提供理论基础 。 关键词 : 四引物扩增受阻突变体系 PCR 中图分类号 : Q81 ( 　　单核苷酸多态性 single nucleotide polymorphism , 酶活性 ,因此对于 3′末端错配的引物 , 以低于正常末 ) SNP 是最具有潜力的第三代分子标记 ,在基因多态 端配对引物的速度延伸 , 当错配碱基的数 目达到一 性研究、基因图谱构建 、性状和疾病连锁分析中具有 定程度或者条件达到一定的严谨程度时 ,3′末端碱 重要作用 。因而 SNP 测定是当前国际上研究的热 基则因磷酸二酯键形成困难而不能延伸 ,反应终止 , 点 ,已经开发出许多商品化仪器 。目前 , 对于 SNP 也就得不到特异长度 的扩增条带 , 从而表 明模板 的检测方法有很多种[ 1] ,基于 PCR 技术的常用方法 DNA 没有与引物 3′末端相应的突变 ;如果 PCR 结果 ( ) 能得到特异长度的扩增条带 ,表明模板 DNA 上具有 主要有 PCR 直接分析法 direct analysis , DA 、限制 ( ) 与引物 3′末端相应的突变[3 ] 。 性酶切片段长度多态性 RFLP 、单链构象多态性 ( ) ( ) 因此 ,针对不同的已知突变 ,设计适当的引物 , SSCP 、异源双链分析 heteroduplex analysis , HA 、 ( ) 可以通过 PCR 方法和电泳图谱直接达到区分突变 等位基因特异性扩增 ASA 以及在此基础上的衍生 技术和 DNA 测序法等 。虽然这些技术在某种程度 型与野生型的目的。在突变点的两侧分别设计一对 上能完成对 SNP 的检测 ,但存在一些不足[2 ] ,主要 外引物和一对特异性内引物 ,特异性内引物用来检 表现为检测过程繁琐 ,检测所用时间长 ,试剂昂贵 测突变是否发生 ,外引物在 PCR 反应中不但作为阳 等 ,从而不利于在生产中推广应用 。 性参照而且和特异性内引物分别配对有选择性地扩 T