扫描电子显微镜生物样品制备技术.pptVIP

第五章 扫描电镜生物样品制备技术;恭跟专碴功澡润涨俄秩档惰馏祟踊菠佩痴劲完源弃被君试爸脐担运墨糠御扫描电子显微镜生物样品制备技术扫描电子显微镜生物样品制备技术;第一节 常规生物样品SEM制备技术;Features of SEM;Features of SEM;Features of SEM;Features of SEM;材料学土聚水泥; 制备扫描电镜样品的总要求 在不损伤样品原始结构状态的情况下，保证样品的体积和表面积不发生改变，充分暴露样品表面的微细结构 。;生物样品的特性;扫描电镜生物样品要求： 不含水份 具有较高的二次电子发射率 良好的导电性 耐热性 最大限度的保持样品的形貌; 扫描电镜样品常规制备的操作程序 1. 取 材 2. 清 洗 3. 固 定 4. 脱 水 5. 干 燥（置换） 6. 粘 托 7. 镀 膜（导电处理）; 一、 取 材 要 点： 确定观察样品的目标 要求及注意事项： 做好充分准备（试剂、仪器、器械等） 保护观察面，作好标记 速度要快 ，每次取材数量不宜过多 大小要合适 10 × 10 × 5毫米 避免拉割、挤压;二、清洗 目的：去除观察面的杂质，充分暴露观察面 方法：物理方法: 漂洗、换洗、加压冲洗、振荡超声。 化学方法: 用酶消化法 注意事项： 在保证不破坏观察面的条件下，充分暴露观察面 不要损伤观察面或者使样品膨胀、收缩等 不要将样品裸露在空间，防止样品皱缩变型;清洗液的选择;三、 固定 目的： 保存样品表面的真实结构； 硬化组织，减少脱水干燥时水的表面张力对样品的损伤； 提高样品的二次电子发射率； 提高样品的耐热性和导电性。 常用的固定剂： 2.5%戊二醛 （1～3h) 1.0%四氧化锇(30’~1h) 固定温度： 室 温，一般以4℃为宜。;四、脱水 要求：不改变样品的体积和表面积的情况 下，去除样品中的水份。 常用的脱水剂：乙醇、丙酮 方法：梯度脱水 时间：视样品大小而定 注意事项：避免裸露，夹伤;五、干燥 目的：去除样品中的脱水剂 方法：空气干燥法、冷冻干燥法、 叔丁醇干燥法、临界点干燥法等 常用干燥法：叔丁醇干燥法、临界点干燥法;空气干燥法;冷冻干燥法; ;临界点干燥法 原理：利用物质在临界状态时，气相与液相 的界面消失，样品在没有表面张力的 情况下进行干燥。 步骤：脱水 置换（醋酸异戊酯） 预冷 放入样品 注入液态CO2 CO2置换 CO2加温气化 排除CO2 温度：31.4度 压力：73个大气压;临界点干燥法; Comparison between critical point drying and air drying ; 六、粘托 SEM样品在干燥处理或金属镀膜之前，需用特制导电胶或双面胶将样品粘贴在金属样品台上。 导电胶一般具有黏着力较强、容易挥发固化、干燥后表面电阻率低、导电性能好等特点。 要点：稳，钝角;样 品 粘 托 Fixing the specimen ;七、镀膜（样品的导电处理） 目的：使样品导电，增加二次电子的发射率 金属镀膜技术：包括真空喷镀法和离子溅射法;真空喷镀法 方法：在高真空中使金属加热蒸发，在 样品表面沉积形成一层金属膜。 缺点：金属损耗大，容易产生污染和热 损伤，容易