猪吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）定量检测试剂盒（ELISA）.PDFVIP

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 2,3- IDO ELISA 2,3- IDO ELISA 猪吲哚胺22,,33--双加氧酶（IIDDOO）定量检测试剂盒（EELLIISSAA） 使用说明书 【试剂盒名称】 猪吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测猪血清、血浆及相关液体样本中吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）的含量。 【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预 先包被猪吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤 除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加 入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作 用下变成黄色，颜色的深浅与样品中猪吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）浓度呈正相关，450nm 波 长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中猪吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）含 量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板 12孔×8 条 7 显色剂A液 6mL 2 标准品 0.3mL×6 管 8 显色剂B液 6mL 3 20倍浓缩洗涤液 25mL 9 终止液 6mL 4 样本稀释液 6mL 10 说明书 1份 5 特殊稀释液 6mL 11 封板膜 2张 6 酶标试剂 6mL 12 密封袋 1个 备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：24、12、6、3、1.5、0.75U/L. 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30 分钟。 2、配液：用蒸馏水将20 倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、 1 待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先 加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5 倍）；空白对照孔不加。 4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干，如此重复洗板4 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。 6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。 7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干，如此重复洗板4 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。 9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s （或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。 10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。 11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm 波长测量各孔的吸光值（OD值）。 12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样 本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓 度为实际测定浓度乘以稀释倍数。 【样本要求】 1、样本不能含叠氮钠（NaN），因为叠氮钠（NaN）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。