不同炎症状态下犬年轻恒牙牙髓干细胞增殖及成骨分化能力的改变.pdf

北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） ·８７８· ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＰＥＫＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＨＥＡＬＴＨＳＣＩＥＮＣＥＳ）　Ｖｏｌ．４８　Ｎｏ．５　Ｏｃｔ．２０１６ ·论著 · 不同炎症状态下犬年轻恒牙牙髓干细胞增殖及 成骨分化能力的改变 凌　龙，赵玉鸣，葛立宏△ （北京大学口腔医学院·口腔医院，儿童口腔科　口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室　口腔数字医学北 京市重点实验室，北京　１０００８１） ［摘　要］目的：探究不同炎症状态对比格犬（Ｂｅａｇｌｅ犬）年轻恒牙牙髓干细胞增殖及成骨能力的影响，为炎症牙髓 干细胞的应用提供理论依据。方法：选取Ｂｅａｇｌｅ犬年轻恒前磨牙１４颗，通过开髓后牙髓暴露的方法建立牙髓炎模 型。对照组于开髓后立即拔髓，实验组分别于术后２周和６周拔出牙髓组织。ＨＥ染色确定牙髓炎症程度，提取不 同炎症状态下牙髓组织 ＲＮＡ，实时荧光定量 ＰＣＲ（ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ）检测炎症因子肿瘤坏死因子 （ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓ α ｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）、白细胞介素（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ）家族ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ１０的表达。酶消化法分离培养正常牙髓干细胞 α α β （ｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＤＰＳＣ）和炎症牙髓干细胞（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＤＰＳＣ，ＩＤＰＳＣ），细胞计数试剂盒（ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ８， ＣＣＫ８）法测定其生长曲线，并对其进行成骨分化诱导，茜素红染色，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测成骨相关基因骨涎蛋白 （ｂｏｎｅｓｉａｌｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＢＳＰ）、碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）、牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎｓｉａｌｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＤＳＰＰ） 的表达情况。结果：开髓暴露２周和６周后，根管内仍有存活的牙髓组织，伴有不同程度的炎症细胞浸润，６周组牙 髓中炎症因子高表达。各组牙髓均可分离培养出牙髓干细胞，ＩＤＰＳＣ的增殖能力强于ＤＰＳＣ。经成骨诱导后实验 组细胞ＢＳＰ、ＡＬＰ和ＤＳＰＰ的表达均显著高于ＤＰＳＣ（Ｐ＜０．０１），但６周组表达显著低于２周组（Ｐ＜０．０１）。结论： Ｂｅａｇｌｅ犬年轻恒牙早期牙髓炎症状态下，牙髓干细胞的增殖和成骨分化能力均有所增强。 ［关键词］牙髓炎；间充质干细胞；成骨细胞；细胞增殖；细胞分化 ［中图分类号］Ｒ７８１．３３　　［文献标志码］Ａ　　［文章编号］１６７１１６７Ｘ（２０１６）０５０８７８０６ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１１６７Ｘ．２０１６．０５．０２４ Ｉｍｐａｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｐｕｌｐｉｔｉｓｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｓｔｅｍｃｅｌｌｉｎＢｅａｇｌｅｉｍｍａｔｕｒｅｐｒｅｍｏｌａｒｓ △ ＬＩＮＧＬｏｎｇ，ＺＨＡＯＹｕｍｉｎｇ，ＧＥＬｉｈｏｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃＤｅｎｔｉｓｔｒｙ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌａｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ＆ＮａｔｉｏｎａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏ ｒｙｆｏｒＤｉｇｉｔａｌａｎｄＭａｔｅｒｉａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ＆ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤｉｇｉｔａｌＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１， Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｓｔｅｍ ｃｅｌｌ（ＤＰＳＣ）ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｎｏｒｍａｌａｎｄｉｎｆｌａｍｅｄｐｕｌｐｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓｉｎＢｅａｇｌｅｉｍｍａｔｕｒｅｐｒｅｍｏｌａｒｓ， ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｕｓｅｏｆｉｎｆ