生化实验肝糖原提取、鉴定与定量实验流程.docVIP

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2017-08-07 发布于北京
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生化实验肝糖原提取、鉴定与定量实验流程.doc

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肝糖原提取、鉴定实验流程吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器，吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。鸡肝约1 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml 研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml 研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取 ml）＋ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml 沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml ＋浓HCl 5滴加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴＋50%NaOH 5滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化实验流程鸡肝0.15 g ＋30%KOH 1.5ml （用吸量管）沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。试剂（ml）空白管标准管样品管蒸馏水 1.0 — — 标准葡萄糖溶液 — 1.0 — 糖原提取液 — — 1.0 0.2%蒽酮溶液（用吸量管） 2.5 2.5 2.5 混匀，沸水浴10分钟，冷却c。在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。