布鲁菌糖基转移酶对细胞炎症反应的影响 - 畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３９ １４３７１４４３ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 布鲁菌糖基转移酶对细胞炎症反应的影响   张 豫，张 辉 ，张 艳，孟 茹，王 震，陈瑞花，张俊波，鲁芝子，陈创夫 　 　 　 　 　 （石河子大学动物科技学院 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室，石河子 ８３２００３） 摘 要：本研究旨在研究布鲁菌糖基转移酶（ ）在诱发胚胎滋养层细胞（ ）炎症反应中的作用。以羊种 ＷｂｏＡ ＨＴＰ８ 　 布鲁菌 为模板，扩增 基因，构建 （ ） 重组表达质粒，转化重组质粒在 （ ）中表 Ｍ５９０ 犠犫狅犃 ｐＥＴ２８ａ＋ ＷｂｏＡ ＢＬ２１ＤＥ ３ 达，通过 和 鉴定，并对重组 蛋白进行纯化。构建 自杀载体 ＳＤＳＰＡＧＥ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ ＷｂｏＡ ＧＥＭ７ｚｆＷｂｏＡ ｐ Δ ＳａｃＢ，通过同源重组的方法，筛选布鲁菌犠犫狅犃基因缺失株Δ犠犫狅犃，并进行 ＰＣＲ鉴定和遗传稳定性检测。然后将 纯化的 蛋白与 分别作用于胚胎滋养层细胞， 检测 、 、 和乳酸脱氢酶（ ） ＷｂｏＡ 犠犫狅犃 ＥＬＩＳＡ ＩＬ６ＩＬ１０ＴＮＦ ＬＤＨ Δ α 的相对变化量。结果成功纯化了 蛋白，构建了 ， 侵染胚胎滋养层细胞诱导产生炎症细胞因 ＷｂｏＡ 犠犫狅犃 犠犫狅犃 Δ Δ 子 、 和 均低于 对照组，差异显著（ ）， 蛋白作用胚胎滋养层细胞时，炎症细胞 ＩＬ６ＩＬ１０ ＴＮＦ Ｍ５９０ 犘 ０．０５ ＷｂｏＡ α ＜ 因子 、 和 均高于 对照组，差异极显著（ ）。本研究表明 蛋白具有细胞毒作用， ＩＬ６ＴＮＦ ＬＤＨ ＰＢＳ 犘 ０．０１ ＷｂｏＡ α ＜ 布鲁菌的致炎作用与脂多糖 链相关，为进一步阐明布鲁菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。 Ｏ 关键词：布鲁菌；糖基转移酶；炎症细胞因子； ＬＰＳ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６１４ Ａ ０３６６６９６４２０１２０９１４３７０７