核酸内切酶改良型彗星试验用于检测遗传毒物致-中华预防医学杂志.PDF

基础研究 稿号：ZHYF-2013-0813-1096 编辑: 郑湃 核酸内切酶改良型彗星实验用于检测遗传毒物 DNA氧化损伤 赵健 李红丽 翟庆峰 邱玉刚 牛勇 戴宇飞 郑玉新 段化伟 DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2014.03. 基金项目：国家自然科学基金81130050）；国家高技术研究发展计划(2012AA062804 ; 国家科技支撑计划(2014BAI12B02 作者单位：100050 北京，中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所 中国疾病预防控制中心 化学污染与健康安全重点实验室（赵健、李红丽、牛勇、戴宇飞、郑玉新、段化伟）；潍坊医学院公 共卫生学院（赵健、翟庆峰、邱玉刚） 通信作者：段化伟，Email：huaweiduan@126.com 【摘要】目的 建立核酸内切酶改良型体外彗星实验方法，并应用该方法检测DNA氧化损伤。方 法 分别应用苯并[a]芘[B(a)P,20µmol/L]、甲基磺酸甲酯[MMS,25µg/ml]、秋水仙素(COL,5mg/L 和长 春新碱(VCR,0.5mg/L 处理人支气管上皮 （16HBE）细胞。采用噻唑蓝 (MTT 实验评估细胞生存率， 常规彗星实验和内切酶改良型彗星实验分别检测DNA损伤和氧化损伤，流式细胞术检测细胞内活性 氧改变。结果 MTT实验显示，B(a P、MMS、COL、VCR 染毒后可引起较高水平的细胞内活性氧 升高，4个组的细胞生存率分别为：（59.69±2.60）%、（54.33±2.81）%、（53.11±4.00）%、（51.43±3.92） %。常规彗星实验及甲酰胺嘧啶-DNA-糖基化 (formamidopyrimidine-DNA-glycosylase，FPG 酶彗星实 验均检测到B(a)P、MMS、COL、VCR 引发的DNA损伤。FPG酶彗星实验中，Olive尾距改变最明 显，缓冲液组的B(a P、MMS、COL、VCR组Olive尾距分别为22.99±17.33、31.65±18.86、19.86±9.56 和 17.02±9.39，FPG酶处理后Olive尾距分别为34.50±17.29、43.80±10.06、33.10±12.38和28.60±10.53， 较缓冲液组分别增加58.94%、38.48%、66.86%和68.21%(t值分别为3.91、3.89、6.66和3.87，P值 均＜0.05 。相关性分析显示，Olive尾距与细胞内活性氧也有较好的相关性（r=0.77,P0.05）。结论 FPG 酶改良型彗星实验可以有效的检测遗传毒物所致的DNA氧化损伤改变。 【关键词】诱变剂；DNA；核酸内切酶;氧化损伤；彗星实验 Endonuclease modified comet assay for oxidative DNA damage induced by detection of genetic toxiants Zhao Jian, Li Hongli, Zhai Qingfeng, Qiu Yugang,Niu Yong,Dai Yufei, Zheng Yuxin,Duan Huawei. Key Lab of Chemical Safty and Health, National Institute of Occupational Health and Poison Control,ChineseCenterfor Disease ControlandPrevention,Beijing, 100050 Correspondingauthor:DuanHuawei,Email:huaweiduan@126.com 【Abstract】 Objective The aim of this study was to investigate the use of the lesion-specific endonucleases-modifiedcometassayforanalysisofDNAoxidationincelllines.MethodsDNAbreaks and oxidative damage were evaluated by normal alkaline and formamidopyrimidine-DNA-glycosylase(FPG -modied comet assays. Cytotoxi