牛黄类药材及其中成药中胆红素含量测定方法的研究-中国药品标准杂志.DOC

六应丸中牛黄品种和质量控制方法的研究 郝博1，曹帅2 ，夏晶2 ，季申2 （1．国家药典委员会，北京100061；2．上海市食品药品检验所，上海201203） 摘要 目的：建立六应丸中牛黄质量的控制方法，切实保证投料用牛黄的质量和工艺的稳定性，为六应丸的疗效和应用安全提供保障。方法：采用高效液相色谱法测定样品中总胆红素及游离胆红素的含量，根据不同类型胆红素的含量综合评价其中牛黄的质量；色谱柱为Kromasil 100? C18（4.6 mm×150 mm，5μm），乙腈-1％冰醋酸（95∶5）为流动相，检测波长为450nm。结果：游离胆红素和总胆红素的平均加样回收率分别为89.7%（RSD=4.97%, n=9）、96.6%（RSD=1.21%, n=9）；胆红素在7.344～122.4 μg·ml-1浓度范围内线性关alculus Bovis in Liuying Pills Hao Bo1，Cao Shuai2，Xia Jing2，Ji Shen2* (1. Chinese Pharmacopoeia Commission, Beijing100061； 2. Shanghai Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201203) Abstract Objective： To develop a method for quality control of Calculus Bovis in Liuying Pills,that would be a way to ensure the efficacy of the finished product through monitoring the quality of this raw material. Methods: The free bilirubin and total bilirubin were determined respectively by HPLC . A Kromasil 100?C18 column0（ 4.6 mm×150mm，5μm）was adoptedwith acetonitrile 1% acetic acid (95:5) as the mobile phase，and the detection wavelength was 450nm. Results: , The average recoveries of free bilirubin and total bilirubin were 89.7%（RSD=4.97%, n=9）and 96.6%（RSD=1.21%, n=9）, respectively. The linear rang of bilirubin was 7.344 -122.4μg·ml-1（r=0.999 9）. Conclusion: The method is accurate and specific, the quality of Calculus Bovis in Liuying Pills is reflected by the content and ratio of free bilirubin and total bilirubin. . Key Words: Liuying Pills；Calculus Bovis；quality control；bilirubin 六应丸为2010年版《中国药典》一部收载的微丸制剂，处方由牛黄、雄黄等6味药组成，有清热，解毒，消肿，止痛之功效；用于火毒内盛所致的喉痹、乳蛾等症[1]。该品种为临床急重病症用药品种（国食药监注[2004]21号，其中处方中牛黄国家明确不得以人工牛黄替代，但可用培植牛黄或体外培育牛黄[2]。六应丸为上海雷允上药业有限公司Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；SK8210LHC超声波清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；5430R型离心机（德国Eppendorf公司）；MS2型旋涡混合器（德国IKA公司）。 胆红素对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号10077-200503）；六应丸（生产企业提供，体外培育牛090301，090401）；乙腈为色谱纯， 二氯甲烷、草酸等试剂均为分析纯。 2方法与原理 2.1原理 牛黄为牛的胆色素型结石，结构复杂，其中的胆红素多以胆红素钙盐、钠盐与葡萄糖醛酸、蛋白等结合的方式存在（游离胆红素分子与不同的基团结合形成结合或共价型胆红素），此类胆红素溶解性较差，较难溶于水及一般的有机溶剂，难以用有效的分离、纯化手段直接测定不同形式的结合胆红素或共价胆红素，参考文献报道[7]，本研究