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2000 年第 10 期 利用分光光度法测定纤维素酶中 Cx 酶活性 王 　建 (河南省农业科学院科学实验中心 ,郑州 450002) 　　在以玉米 、大麦 、糠麸 、饼粕等植物性饲料为 1 000 ml 。用以上两种溶液 ,按参考文献[ 1 ]所述 主的家禽饲料中添加纤维素酶可以使构成植物细 方法 ,将 0. 2 mol/ L 乙酸与 0. 2 mol/ L 乙酸钠以 胞壁等不易利用的植物纤维分解成能被吸收的葡 不同体积混合 ,配制成不同p H 值的缓冲溶液 。 萄糖 ,从而提高家禽对高纤维饲料的消化吸收 ,提 2. 2. 2 　试 剂 与 标 准 液 　0. 6 % DNS 试 剂 高饲料利用率 ,降低饲养成本 。 (m/ V) :称取酒石酸钾钠 182 g , 溶于 500 ml 水 β ( 纤维素酶是 由外切 - 1 , 4 葡聚糖酶 C1 中 ,加热 ; 于热溶液 中依次加 6 g DNS 、20. 8 g ) β ( ) β 酶 、内切 - 1 ,4 葡聚糖酶 Cx 酶 和 - 葡聚糖 NaOH 、5 g苯酚 、5 g 苯酚 、5 g 无水亚硫酸钠 ,搅拌 苷酶组成的一种复合型水解酶 。其中各种酶活性 使其溶解 ,冷却后定容至 1 000 ml 。1 %CMC 溶 的测定方法 , 目前尚无国家标准 。据有关报道 ,有 液 :称取 1 g CMC ,用乙酸 - 乙酸钠缓冲溶液溶解 粘度法 、浊度法 、滤纸崩溃法和 3 ,5 - 二硝基水杨 并定容至 100 ml 。1 mg/ ml 葡萄糖标准溶液 :准 ( ) ( ) 酸 DNS 比色法 分光光度法 。前两种方法较为 确称取于 80 ℃烘干恒重过的无水葡萄糖 0. 1000 ( ) 复杂而且精密度较差 偏差为 10 %左右 。本实 ( ) g ,用去离子水溶解后 ,加 1 mg 叠氮化钠 防腐 , 验对 Cx 酶活性的DNS 比色测定法进行了研究 。 用水定容至 100 ml 。 2. 3 　Cx 酶活性的测定 1 　方法原理和 Cx 酶活性定义 2. 3. 1 　标准曲线的配制 　准确吸取 1 mg/ ml 葡 1. 1 　方法原理 萄糖标准溶液 0 ,0. 2 ,0. 4 ,0. 6 ,0. 8 ,1. 0 ml 于刻 Cx 酶在适当p H 值和温度下 ,水解羧 甲基纤 度试管中 ,分别加去离子水至 2 ml ,加 DNS 试剂 ( ) 维素钠 CMC 释放出的还原性葡萄糖与 DNS 反 2 ml ,于沸水浴中加热 10 分钟后 ,定容至 15 ml 。 应 ,发生颜色变化 ,显色基团在 550 nm 处的吸光 在 550 nm 波长下测定其吸光度 。 度与释放出的葡萄糖量成正比, 即与纤维素酶制 2. 3. 2 　酶液的制备 　按酶活性的高低 ,称取酶粉 剂中的