鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达3.pdf

中　国　生 　物 　工 　程 　杂 　志 第 23 卷第 8 期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2003 年 8 月 鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达 1 1 1 1 1 2 2 2 高 　波 　宋红芹 　陈　芹 　李碧春 　孙怀昌 　王克华 　窦套存 丁 　铲 ( 1 扬州大学畜牧兽医学院　扬州 　225009 　　2 中国农业科学院家禽科学研究所 　扬州 　225009) ( ) 摘要 　用高保真 PCR 法分别从中国狼山鸡基因组 DNA 中扩增出卵清蛋白基因 ov 的 5′和 3′ 调控区 ,将其克隆入p GEMT 载体 ,经序列测定证明与已发表的 ov 基因相应区域无差异 。将上述 调控序列插入黏粒载体 ,构建成鸡输卵管特异表达载体 pOV 。再将 lacZ 报告基因克隆在上述载 体 5′调控区的下游 ,获得的重组载体命名为pOVlacZ 。用脂质体包裹的pOVlacZ 注射产蛋鸡 ,RT PCR 检测结果表明 lacZ 基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达 ,不能在肝 、脾 、肾、心等组织表达 。 在上述组织中 ,仅输卵管膨大部能检测出β ( ) 半乳糖苷酶活性 1167mUml ,注射雌激素对报告基 ( ) ( ) 因的表达具有促进作用 1533 mUml ,重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中 1733mUml 。结果表 明 ,克隆的鸡 ov 基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达 ,构建的载体能用于鸡输 卵管生物反应器的研制 。 关键词 　鸡卵清蛋白基因调控区　输卵管定位表达载体 　体内表达 　　转基因家禽输卵管生物反应器研制的主要过 13 　PCR 扩增 程包括输卵管特异表达载体的构建 、鸡胚胎的基因 根据已发表的鸡 ov 基因序列[2 ] 设计 PCR 引 导入和转基因后代的繁殖及选育 。其中 ,组织特异 物 ,5′调控区的正 、反向引物的两端分别引入 S al 表达载体的构建是输卵管生物反应器研制的关键 , Ⅰ和 B am H Ⅰ及 X ho Ⅰ位点 , 其序列分别是 5′ 也是决定其产业化价值的主要瓶颈之一 。本研究 TTGTCGACGCAGACTGACATGCATTTCATAGG 3′和 5′ 用 ov 基因的5′和 3′调控区构建成鸡输卵管特异 ATGGATCCCTCGAGGGTGAACTCTGAGTTGTCTAGAGC 表达载体 ,并以 lacZ 为报告基因进行了鸡体 内表 3′;3′调控区的正 、反向引物的两端分别引入 X ho 达试验研究 ,现将结果报告如下 。 Ⅰ和 N ot Ⅰ位 点 , 其 序 列 分 别 是 5′ ATCTCGA GA GA GTGGCATCAATGGCTTCTGA G3′ 和 1 　材料与方法 5′ATGCGGCCGCATTGGACACACTGCTCCA GATGA G 11 　菌种及试剂 3′,引物在 o