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总第23期/2015年10月 SPF鸡同时免疫新城疫、传染性支气管炎和禽偏肺病毒活疫苗后的 免疫反应和相互作用 摘要： 我们评估了1日龄无特定病原体（SPF）雏鸡同时接种鸡新城疫病毒(NDV)疫苗、禽偏肺病毒(aMPV)疫苗和传染性支气管 炎病毒(IBV)疫苗后三者之间的相互作用。雏鸡被分成八个组:7组接种NDV疫苗,aMPV疫苗和IBV疫苗(单独,两种或三种)，另 一组作为未接种疫苗的对照组。各组之间的NDV血细胞凝集抑制(HI)抗体滴度相似,但均在保护临界值以上。当与其他活疫苗 联合使用时，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的aMPV抗体水平受到了抑制。当(单独或同时)接种NDV、aMPV或IBV疫苗时 显示，与未接种疫苗组相比，气管中CD4 +,CD8 +细胞和IgA生成B细胞的数量显著增加。免疫组之间的差异并不显著。同时 接种NDV、aMPV以及IBV活疫苗并不影响aMPV或IBV的保护效果。 1．概述 鸡新城疫病毒(NDV)、禽偏肺病毒(aMPV)和传染性支气管炎病毒(IBV)是引起鸡呼吸道疾病的重要常见病原体。随着全球 范围内活疫苗和灭活疫苗，包括二者联合的广泛使用，这些病原体造成的损失明显减少。这3种病毒初期在呼吸道上皮细胞 进行复制,因此如果需要同时应用这3种活疫苗的话，其诱导保护性免疫的能力可能会下降。之前的体内研究表明,IBV会干扰 鸡体内强毒力NDV、NDV活疫苗和aMPV疫苗的复制。Ganapathy 等人(2005)表明,NDV免疫延迟了aMPV活疫苗的复制,同时降低 了体液抗体反应。这些研究是通过血清抗体滴度的测定，使用ELISA或HI试验显示疫苗同时免疫对雏鸡的影响。已经表明全 身性免疫反应与抵抗IBV和aMPV感染的保护能力没有太大关联。通过研究NDV、IBV和aMPV疫苗活病毒,一些作者认为,这些病 毒的抵抗能力可能是由细胞介导的免疫反应和局部免疫反应引起的,但在文章中并没有对其进行研究。 据报道,细胞免疫和局部免疫反应在雏鸡NDV、aMPV和IBV感染中起关键保护作用。已经对单独接种NDV活疫苗或IBV活疫 苗后细胞介导免疫的诱导和作用进行了大量的研究。在联合接种疫苗的研究中,Ganapathy等人(2005)报道,单独免疫NDV或与 aMPV同时进行免疫对于雏鸡泪液中的IgA含量没有影响。尽管在雏鸡中进行呼吸道病毒活疫苗联合免疫的方法应用十分广泛, 但很少有人了解同时免疫NDV,aMPV或IBV病毒活疫苗后的细胞和局部免疫反应。本研究的目的是评估SPF雏鸡体内NDV、aMPV 和IBV病毒活疫苗之间的相互作用。除了体液抗体反应之外,还评估了气管局部免疫反应和细胞介导的免疫反应。此外,还评 价了疫苗免疫对于IBV和aMPV强毒株攻毒的保护能力。 2．材料和方法 2.1 鸡胚和雏鸡 将SPF白来亨鸡受精胚(罗曼动保，Cuxhaven，德国)在孵化设施中进行孵育(利物浦大学)。根据动物福利指南，将雏鸡 放置在单独的隔离和饲养装置内,遵循严格的生物安全措施。自由采食和饮水。 2.2 疫苗 NDV(VG/GA株),aMPV(B亚型),IBV(H120株)活疫苗由梅里亚SAS(法国里昂)惠赠。疫苗按照制造商的说明进行稀释。NDV和 aMPV疫苗,每1000羽份溶解于2mL的冷冻无菌水(SW)中，随后使用98mLSW彻底混合。5000羽份IBV疫苗溶解于5mL的SW中，然后 吸出1mL与99mL的SW混合。在进行联合免疫时，首先溶解NDV疫苗,然后紧接着是aMPV或IBV疫苗，方法如前所述。随后将二者 在100毫升SW中混合。三种疫苗联合接种时,使用上述方法溶解NDV aMPV和IBV疫苗,随后将三者全部稀释在100毫升SW中。 2.3 攻毒毒株 2.3.1 IBV Massachusetts (M41)株在鸡胚(ECE)中进行繁殖并在气管组织培养物(TOC)中进行滴定。滴度表示为使半数纤毛停滞的 病毒剂量(CD50)，并使用Reed and Muench方法进行计算(1938)。病毒滴度为105CD /毫升。 50 2.3.2 aMPV 如前所述在TOC上进行B亚型aMPV的病毒传代和滴定。如前所述计算纤毛停滞的病毒剂量(CD 4.5