不同菌株固态生料混合发酵棉籽粕与菜粕.docVIP

不同菌株固态生料混合发酵棉籽粕和菜粕 （1）实验材料 基本原料：棉粕，菜粕，玉米 培养基原料：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，酵母膏，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，酵母浸膏，K2HPO4，柠檬酸氢二铵，无水乙酸钠，Tween80，MgSO4·7H2O，MnSO4·H2O 使用仪器：分光光度计，振荡器（振荡频率120^130次/min往复)恒温水浴，具塞三角烧瓶:100,250 mL，容量瓶:25 mL(棕色)，吸量管:1,3,10 mL，移液管:10,50 mL，漏斗:直径50 mm，表玻璃:直径60 mm。 检测试剂和药品：异丙醇，正己烷，冰醋酸，苯胺，锌粉，3-氨基-1-丙醇，氯化钯，羧甲基纤维na （2）菌株准备： （3） 培养基的制备 牛肉膏蛋白胨培养基( 培养芽孢杆菌) : 牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g( 固体培养基加琼脂18 ～20 g) ，蒸馏水1 L，pH 7. 0 ～ 7. 2，120℃灭菌30 min。 YPD 培养基( 培养酵母菌) : 酵母膏5 g，蛋白胨10 g，葡萄糖20 g( 固体培养基加琼脂18 ～ 20 g) ，蒸馏水1 L， 120℃灭菌30min。 MRS 培养基( 培养乳酸菌) : 蛋白胨10 g，牛肉膏10 g，葡萄糖20 g，酵母浸膏5 g，K2HPO4 2 g，柠檬酸氢二铵2 g，无水乙酸钠5 g，Tween80 1 mL，MgSO4·7H2O 0. 58 g，MnSO4·H2O 0. 25 g( 固体培养基加琼脂18 ～ 20 g) ，蒸馏水1 L，pH 6. 2 ～ 6. 8， 120℃灭菌30 min。 PDA 培养基( 培养黑曲霉) : 将马铃薯去皮切成小块，称取200 g 置于锅中，加水1 L 煮沸约30 min，6 ～ 8 层纱布滤成清液，滤液中加入葡萄糖20 g( 固体培养基加琼脂18 ～ 20 g) ，补充水分至1 L，加热至融化， 120℃灭菌30 min。 发酵条件：原料棉籽粕粉碎过40 目筛，将棉粕、菜粕，玉米粉按4∶ 4∶ 2 比例混匀 ，料水比1∶ 0. 8，接种量5%，每组设两个个重复置于500 m l三角瓶中静止培养24h，48 h，72h后取出，于50℃下烘干，粉碎分析测定。 实验结果和分析 a测定硫代葡萄糖苷（下面） b测定棉酚含量（下面） c测定粗蛋白（按照教科书） d测定粗纤维（按照教科书） 饲料中游离棉酚的测定方法 2 原理 在3-氨基一1一丙醇存在下用异丙醉与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440 nm处进行比色测定。 3试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1 异丙醇C(CH3)2CHOH,HG 3-1167) 3.2 正己烷 3.3 冰乙酸（GB676） 3.4 苯胺 (CsH,NH,GB6 91):如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏弃去开始和最后的10%蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在(0-4℃)冰箱中，该试剂可稳定几个月。 3.5 3-氨基-1-丙醇(H2NCH,CH2CH2OH）。 3.6 异丙醇-正己烷混合溶剂:6:4(V /V )。 3.7 溶 剂A:量取约500m L异丙醇、正己烷混合溶剂(3.6),2mL3-氨基一1一丙醇(3.5),8m L冰乙酸(3.3)和50 mL水于1000 mL的容量瓶中，再用异丙醇一正己烷混合溶剂(3.6)定容至刻度。 4 仪器、设备 4.1 分光光度计:有10 mm比色池，可在440 nm处测量吸光度 4.2振荡器（振荡频率120^130次/min往复)。 4.3 恒温水浴 4.4 具塞三角烧瓶:100,250 mL 4.5 容量瓶:25 mL(棕色) 4.6 吸量管:1,3,10 mL 4.7 移液管:10,50 mL. 4.8 漏斗:直径50 mm. 4.9 表玻璃:直径60 mm 5 试样制备 采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎过2.8m m孔筛，混匀，装人密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 6 测定步骤 6.1 称取1-2g试样(精确到。.001 g)置于250 ml具塞三角烧瓶(4-4)中，加入20粒玻璃珠，用移液管(4.7)准确加入50 mL溶剂A(3.7)，塞紧瓶塞，放入振荡器(4.2)内振荡1 h(每分钟120次左右)。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗(4.8)上加盖一表玻璃(4.9)以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100 mL具塞三角烧瓶(4.4)中。 6.2 用吸量管(4.6)吸取等量双份滤液5-10 mL(每份约含50^100 yg的棉酚)分别至两个25mL棕色 容量瓶(4-5)a和b中，如果需要