HPLC法定量分析微生物法制备液中产物γ-氨基丁酸和底物L-.PDFVIP

190 2015, Vol.36, No.24 食品科学 ※成分分析 HPLC法定量分析微生物法制备液中产物 γ L -氨基丁酸和底物 -谷氨酸 朱广跃，杨 卫，吴 健，马翠云，赵 毅，吴 笛，高小雪，戴桂馥* （郑州大学生命科学学院，河南郑州 450001 ） 摘  要： γ γ L L 建立一种测定微生物法制备液中 -氨基丁酸（ -aminobutyric acid ，GABA ）和 -谷氨酸（ -glutamic ， L -Glu ）的高效液相色谱法。样品经10%三氯乙酸溶液预处理后，用4 mmol/L氯甲酰芴甲酯进行柱前衍生。采用 Phenomenex C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm ，5 µm ），以A [50 mmol/L 乙酸钠溶液（pH 4.8 ）- 甲醇- 乙腈- 四氢呋喃 V V V V （82 ∶8.5 ∶8.5 ∶1， / ）] ∶B[50 mmol/L 乙酸钠溶液（pH 4.8 ）- 甲醇- 乙腈- 四氢呋喃（22 ∶38.5 ∶38.5 ∶1， / ）]=30 ∶70 为流动相，流速1.0 mL/min，柱温40 ℃洗脱，检测波长265 nm 。该方法稳定、灵敏、测定周期短、重复性好。在 L GABA和 -Glu质量浓度为20～400 µg/mL范围内有良好的线性关系。与常用衍生剂邻苯二甲醛相比，衍生产物的稳 定性更好，且无需梯度洗脱。 γ L 关键词：高效液相色谱；微生物制备液； -氨基丁酸； -谷氨酸；氯甲酰芴甲酯 Quantitative Analysis of γ-Aminobutyric Acid and L-Glutamic Acid in Microbial Fermentation Broth by HPLC ZHU Guangyue, YANG Wei, WU Jian, MA Cuiyun, ZHAO Yi, WU Di, GAO Xiaoxue, DAI Guifu* (School of Life Sciences, Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, China) Abstract: An improved high performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of γ-aminobutyric acid (GABA) and L-glutamic acid (L-Glu) in microbial fermentation broth was developed. Amino acids in samples were derivatized with 4 mmol/L 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC-Cl) after being pretreated with 10% trichloroacetic acid. The chromatographic separation was performed on a Phenomenex C18 column (4.6 mm × 250 mm, 5 µm) using A