试验湖州师范学院医学院.PPT

病原生物学实验 一、实验目的 1．学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无菌观念； 2．通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见人体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和常见寄生虫的病原学检查方法； 3．通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态度和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病的诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的实验方法与技术打下一定的基础。 二、实验要求 1．每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生错误。 2．实验过程中必须持严肃认真的态度。 3．对实验结果必须进行仔细地观察和认真地记录，然后进行科学分析，得出恰当结论。 4．独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力求反映实际标本的原状。 5．切实遵守实验室规则。 （一）显微镜油镜的使用和保养 1.显微镜基本知识 显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨力：是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： R=0.61λ/N.A 式中R：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?：可见光的波长（平均0.55?m) N.A =n·sin(α/2 )为镜口率 n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 目前实用范围内物镜的最大镜口率为1.4, R=0.61*0.55/1.4=0.25 而人眼的分辨率为0.25mm,所以一个大小为0.25 ?m的微粒需经显微镜放大1000倍便可以观察。 细菌的形态学检查方法——染色标本检查法 （三）革兰染色法 该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的，至今仍广泛应用。 2.实验材料与方法 （1）材料: 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物 染液：结晶紫染液、卢戈碘液 95%酒清、稀释复红 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等 （2） 方法： 细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 革兰染色：初染、媒染、脱色、复染 油镜使用：观察染色结果并记录 染色标本检查的基本程序 涂片－→干燥－→固定－→染色 ★涂片：接种环灭菌、平板取材、细菌涂布 ★干燥：自然干燥、热空气干燥 ★固定：通过火焰外焰三次 ★染色：初染、媒染、脱色、复染 革兰染色法（Gram染色） 染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液 95％酒精、稀释复红 染色方法： 3.革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 4.革兰染色意义 ★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性 影响革兰染色的因素 1. 操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短 2. 染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长 3. 细菌因素： ★细菌种类 ★细菌菌龄 实验报告基本格式 湖州师范学院 ?????病原生物学与免疫学实验 实验报告 实验项目名称：********** ??一、实验目的要求： ?? ??二、实验原理： ??三、实验材料： ? ??四、实验方法和操作步骤： ????? ? ??五、实验结果： ? 六、实验结果分析和总结： 主讲人:蒋培余 1．进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反折，工作服要经常清洗消毒。2．书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实验室后放入实验台的抽屉内。