GB 15193.12-2003体外哺乳类细胞(V79/HGPRT)基因突变试验.pdf

ICS07.100 C 53 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB 15193.12-2003 代替GB15193.12-1994 体外哺乳类细胞(V79/HGPRT) 基因突变试验 V79/HGPRTgenemutationtest 2003-09-24发布 2004-05-01实施 中华 人 民共 和 国卫 生 部 分六 中 国国家标 准化 管理委 员会 ‘’卜 GB 15193.12-2003 月IJ 舀 本标准全文强制。 本标准代替GB15193.12-1994((体外哺乳类细胞(V79/HGPRT)基因突变试验》。 本标准与GB15193.12-1994相比主要修改如下: — 在 “范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能 对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新 资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、 农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。 自本标准实施之日起，GB15193.12-1994同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准主要起草人:冯继农、高兀 本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。 GB 15193.12-2003 体外哺乳类细胞(V79/HGPRT)基因突变试验 1 范围 本标准规定了体外哺乳类细胞(V79/HGPR丁)基因突变试验的基本技术要求。 本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、 生物和物理因素的遗传毒性，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源 食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业 用微生物等 2 原理 细胞在正常培养条件下，对6-TG的毒性作用敏感，不能生存，在致癌物和/或致突变物作用下，某 些细胞X染色体上控制次黄嚎吟鸟嚷吟磷酸核糖转移酶(HGPRT)的结构基因发生突变，不能再产生 HGPRT，从而使突变细胞对6-TG具有抗性作用。这些突变细胞在含有6-TG的选择性培养液中能继 续分裂并形成集落。根据突变集落形成数，计算突变率以判定受试物的致突变性。 3 材料和试剂 3，细胞:使用中国仓鼠肺(V79)细胞株。为了减少自发突变率，正式实验前先将野生型细胞群体中 存在的自发HGPRT座位突变体选择性杀灭，方法是将野生型细胞接种于含次黄嚷吟及胸腺啼吮、氨 甲喋岭、甘氨酸的MEM培养液中培养1周，然后重新接种于MEM培养液中。 3.2 培养液:采用MEM(Eagle)基础培养液或DMEM培养液，补以10%小牛血清及适量抗菌素(青霉 素、链霉素)。 3.3 磷酸盐缓冲液(无钙、镁PBS) 磷酸二氢钾(KH,PO,) 200mg 磷酸氢二钠(Na,HP04·12H20) 2.89g 氯化钾(KCl) 200mg 氯化钠(NaCD 8.0g 双蒸水 1000mL 高压消毒，1210C,0.103MPa,20min, 3.4 胰蛋白酶/EDTA溶液:用无钙、镁PBS配制，胰酶的浓度为。.05%,EDTA的浓度为。.02%,胰