麦冬有效部位对HUVEC凝血与纤溶活性物质的影响.pdfVIP

南京中医药大学学报2008年7月第24卷第4期 ·--— — 242 ·--—— TCM UNIVERSITY Vo1．24 ．4 Jul~．20鸺 麦冬有效部位对 HUVEC凝血与纤溶活性物质的影 响 康贽 ，于洁 ，胡杨 ，熊超 ，王佳媚 ，张小燕 ，蒋凤荣 ，张旭 ， ， ( 南京中医药大学基础医学院， 南京中医药大学药学院， 江苏省中药炮制重点实验室， 江苏省方剂研究重点实验室， 江苏南京 210046) 摘要：目的 探讨麦冬正丁醇提取部位、薯蓣皂苷元及豆甾醇对培养HUVEC抗凝、纤溶及抗自由基损伤等作用。方法 经H202和麦冬正丁醇提取部位、薯蓣皂苷元及豆甾醇作用于HUVEC后，取上清培养液测定tPA、PA1．1、TM的含量。结果 麦冬正丁醇提取部位、薯蓣皂苷元及豆甾醇可缓解H202所致tPA、PA1．1的水平降低。结论 麦冬有效部位可减轻自 由基对HUVEC的损伤，在一定程度上通过对tPA、PAl—l含量的调节，维持内皮细胞正常生理功能，从而能有效防治血瘀 证。 关键词：麦冬有效部位；HUVEC；tPA；PA1．1；TM 中图号：R282．710．5 文献标识码：A 文章编号：1000—5005(2008)04—0242—03 血瘀是临床常见的一种病理状态，中医学之 1 材料 血瘀与现代医学之血栓密切相关。血瘀证是内外 1．1药材 致病因素共同作用下机体的凝血一纤溶系统及血 川麦冬 Ophiopogon Japonicus(Thumb．)Ker- 小板功能等的紊乱，所导致的“血行失度”、“血 Gaw1．，购自四川绵阳，经本校中药鉴定室鉴定属 脉瘀阻”的过程。血瘀证是临床常见的一种中医 正品。 证型，其病理改变基础可能与血管内皮细胞损伤 1．2 提取与分离 密切相关_l J。诸多研究表明，养阴生津方药与其 川麦冬干燥块根10 kg，60~C干燥8 h，粉碎， 它方药配伍对多种原因引起的血瘀病理状态具有 过10目筛，混匀，加70％乙醇100 L浸泡12 h，热 明显的改善作用[2,3 3，故认为养阴生津法是治疗 回流提取2 h，过滤；重复提取2次，合并提取液， 血瘀证的重要法则【 。麦冬是常用滋阴中药，功 回收溶剂至无醇味；后加三氯甲烷提取，水液继续 效养阴生津、润肺清心。现代化学成分研究发现， 用水饱和正丁醇提取，得到三氯甲烷提取液，水饱 麦冬含有甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成 和正丁醇提取液和水提取液，分别回收溶剂。 分，其提取物具有明显的心血管保护作用，并呈一 1．3 试剂与仪器 定的量效关系L51。 RPMI-1640培养基(GIBCO，USA)(每升含 本文用过氧化氢(H202)造模引起人脐静脉血 10％小牛血清、L一谷氨酰胺0．33 mg，青霉素100 管内皮细胞(HUVEC)凋亡，用ELASA法测定HU u、链霉素 100 U、pH7．4)；胰蛋白酶(MERCK， VEC分泌的与凝血和纤溶有关活性物质——组织 USA)；H202(分析纯，镇江市化学试剂厂，批号： 纤溶酶原激活物(tPA)，纤溶酶原激活物抑制物 2001111)，二甲基亚砜(DMSO)(Merck，Germany)； (PAl一1)及血栓调节蛋白(TM)的含量变化，以探 96孔细胞培养板(Costar，Denmark)；细胞培养箱 讨麦冬正丁醇提取部位、薯蓣皂苷元及豆甾醇对 (NAPCO，USA)；倒置相差显微镜(OLYMPUS， 培养HUVEC抗凝、纤溶及抗自由基损伤等作用。 JAPAN)；薯蓣皂苷元(中国药品检验所)，豆甾醇 收稿日期：2008—02—05：修稿日期：