鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白GFP融合分子在COS7细胞内的表达.pdfVIP

· 40· 生物技术 中国畜牧兽医 2008年第 35卷第7期 鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白GFP 融合分子在COS7细胞内的表达 李姣 ，张红 ，张改平 ，王爱萍 ，易明林 ，郅玉宝 ，鲁琨 ，张丽萍 (1．河南省动物免疫学重点实验室，郑州 450002；2．郑州大学，郑州 450001；3．河南教育学院，郑州 450003) 摘要：将鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白基因插入增强型绿色荧光表达载体pEGFP—C1中，构建了真核表达载 体pEGFP—VP2。PCR与酶切鉴定结果表明VP2基因成功插入到表达载体pEGFP—C1中。脂质体法转染COS7细胞后，荧光 显微镜检测到了GFP—VP2融合蛋白的表达。用200 vg／ral的G418成功筛选到了稳定表达GFP—VP2融合蛋白的细胞系，表 达蛋白经镍亲和柱得到了纯化。 关键词：鸡；传染性法氏囊病病毒；VP2蛋白；真核表达；GFP融合蛋白 中图分类号：$852．65 9．4 文献标识码：A 文章编号：1671～7236(2008)07—0040—03 鸡传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒 1 材料和方法 (infectious bursal disease virus，IBDV)引起的鸡的 1．1 质粒、细胞与试剂 pEGFP—C1质粒(Clotech 一 种高致病性、高死亡率的传染病。在IBDV结构 公司)，COS7细胞株(中科院上海细胞生物所)，脂 蛋白中VP2和VP3是组成病毒核衣壳的主要成 质体 LipofectamineTm2000(Invitrogen公 司)， 分。IBDV核衣壳的外表面由260个VP2三聚体形 DH5a感受态细胞、限制酶、T4连接酶、DNA聚合 成，核衣壳的内表面由200个Y型VP3三聚体组成 酶(TaKaRa公司)，DMEM培养基(GIBCO公司)， (BOttcher等，1997)。研究结果已经证实VP2主要 胎牛血清(杭州四季青)，Ni—NET His Bind Risine 暴露在核衣壳的外面，携带病毒主要的中和性抗原 (Novagen公司)。 表位(Becht等，1998)、细胞受体结合表位(Chi等， 1．2 IBDV VP2基因 IBDV NB毒株基因组A片 2007)以及病毒毒力(Brandt等，2001)相关，并引起 段基因由本实验室反转录合成并保存于pCI—neo— 宿主细胞 的凋亡 (Rodriguez—Lecompte等，2005)， IBDV质粒中。根据 GenBank accession AY31 9768 因而VP2蛋白成为研究 IBDV的热点。VP2蛋白 IBDV NB毒株基因组A片段核苷酸序列分析，设 与宿主细胞相互作用机理的研究对揭示IBDV感染 计IBDV VP2蛋白基因(1368 bp)扩增引物：P1， 与致病机理、药物开发都有重要的意义。 CGAGAATTCGATGACAAACCTGCAA；P2，CTC_ 绿色荧光蛋白(GFP)是一种从水母中分离出来 GGTACCATGATGATGArGArGArGCACAGCT — 的蛋白，含238个氨基酸残基，在波长450~490 nm ATCCTCCTTAT。 的蓝光激发下能发出绿光，对细胞无任何毒害作用