兰州百合植物组织培养.docVIP

兰州百合的组织培养技术 一、实验目的 1、学习并掌握植物组织培养技术 2、应用植物组织培养技术快速繁殖兰州百合 3、通过以为外植体进行组培，对试验材料消毒、接种，初步掌握外植体愈伤组织诱导的方法。离体的植物组织在一定条件下，可发生“脱分化”，即已经分化了的植物细胞重新分裂生长，形成均一的无组织结构的细胞团，即愈伤组织。这种愈伤组织在一定条件下，又能“再分化”出根和芽等器官。在该过程中，植物生长调节物质起着决定作用，调控愈伤组织的芽或根的分化NH4NO3, KNO3, CaCl2·2H2O, MgSO4·7H2O, KH2PO4, KI, H2BO3， MnSO4·4H2O, ZnSO4·7H2O, Na2·MoO4·2H2O, CuSO4·5H2O, CoCl2·6H2O, Na2?EDTA?2H2O，FeSO4·7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇；琼脂，蔗糖，蒸馏水，NAA，6-BA，1mol/LHCl，1mol/LNaOH；升汞。 2、仪器: 冰箱，天平，酸度计或pH试纸， 电炉，微波炉，高压灭菌锅，烘箱，超净工作台，光照培养箱等 3、基本工具：三角锥瓶、容量瓶、吸量管、量筒、移液器、烧杯、培养皿、滤纸、牛皮纸、、玻璃棒、镊子、剪刀等。MS培养基的配制 1.配制MS培养基母液的配制方法如下： (1)大量元素的配制：按母液配制表1上的量依次称取KNO319g、NH4NO3 16.5g、MgSO4·7H2O 3.7g、KH2PO4 1.7g ,分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，以防互相发生反应，最后用容量瓶定容至1L（如需求量不大可按比例减少）,转入棕色试剂瓶中，贴上标签，置冰箱冷藏保存。 (2)钙盐的配制：称取CaCl2·2H2O 4.4g，用少量的蒸馏水充分溶解，最后用容量瓶定容至1L（如需求量不大可按比例减少）,转入棕色试剂瓶中，贴上标签，置冰箱冷藏保存。 (3)微量元素的配制：依次称取MnSO4·4H2O22.3g、ZnSO4·7H2O 8.6g、H3BO3 6.2g、KI0.83g、Na2MoO4·2H2O 0.25g、CuSO4·5H2O 0.025g、CoCl2·6H2O 0.025g ,分别用少量的蒸馏水彻底溶解，再将它们混溶，最后用容量瓶定容至1L（如需求量不大可按比例减少）,转入棕色试剂瓶中，贴上标签，置冰箱冷藏保存。 (4)铁盐的配制：将称好的FeSO4·4H20和Na2EDTA分别放到450ml蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5 ，最后用容量瓶定容至1 L（如需求量不大可按比例减少）,保存在棕色玻璃瓶中,贴上标签，置冰箱冷藏保存。 编号 种类 1 大量元素 NH4NO3 1900 10 19000 1000 100 KNO3 1650 16500 MgSO4·7H2O 370 3700 KH2PO4 170 1700 2 钙盐 CaCl2·2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4·4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4·7H2O 8.6 860 H3BO3 6.2 620 KI 0.83 83 Na2MoO4·2H20 0.25 25 CuSO4·5H2O 0.025 2.5 CoCl2·6H2O 0.025 2.5 4 铁盐 Na2EDTA 37.30 100 3730 1000 10 FeSO4·4H20 27.80 2780 5 有机成分 甘氨酸 2.00 50 100 500 10 盐酸硫胺素 0.10 5 盐酸吡哆醇 0.5 25 烟酸 0.5 25 肌醇 100 5000 (5)有机成分的配制: 依次称取甘氨酸2.00g、盐酸硫胺素 0.10g、盐酸吡哆醇0.5g、烟酸0.5g,肌醇100g，用少量蒸馏水充分溶解，最后定容至1L（如需求量不大可按比例减少）,转入棕色试剂瓶中，贴上标签，置冰箱冷藏保存。 2.激素溶液的配制 分别称取6-BA、NAA各10mg，将6-BA用1ml的0.1mmol/L的NaOH溶液溶解，将NAA用1ml无水乙醇预溶，溶解过程用水浴锅加热，待溶解完全后，分别用容量瓶定容至100ml，即得到0.1mg/ml的母液（实验时按需要量取）。3. 完全培养基的制备（如需求量不大可按比例减少）。 将买来的新鲜兰州百合的鳞茎拨开，洗去上面的泥土，在用流动的自来水冲