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蛋白质的结构与功能Structure and Function of Protein;第四节 蛋白质的理化性质 ; Pr是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值。;Pr分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。;（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固; 变性后的蛋白质称变性蛋白,能使Pr变性的物质叫Pr变性剂。;变性蛋白质的特点;RNase的变性与复性; 变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。 ;+; 大部分蛋白质均含有带共轭双键的Tyr和Trp。这两种AA在280nm 附近有特征性吸收峰。在此波长范围，Pr的OD280与其浓度成正比。利用这个性质，可以对蛋白质进行定量测定。; 反应 试剂 颜色 反应基团 有此反应的Pr及AA 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 所有蛋白质 Millon反应 Millon,硝酸，亚硝酸 红色 酚基 Tyr 黄色反应 HNO3及NH3 黄、橘黄 苯基 Phe,Tyr 乙醛酸反应 乙醛酸H2SO4 紫红 吲哚 Trp 坂口反应 次氯酸钠,萘酚 红色 胍基 Arg Folin酚试剂反应 CuSO4磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 Tyr 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色 游离氨、羧基 Pro和羟Pro呈黄色;二、蛋白质分离和纯化;分离方法;定义：加入大量中性盐以破坏Pr的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。 原理:破坏Pr两个稳定因素：水化膜和电荷层 中性盐：(NH4)2SO4；Na2SO4；NaCl等。 半饱和硫酸铵沉淀球Pr 饱和硫酸铵沉淀清Pr 优点：Pr不变性，常用。;（二）电泳（electrophoresis) ;电泳;板状电泳; 等电聚胶电泳 (isoelectric focusing gel IEF) ;SDSseparates proteins by MW;试剂：丙酮、乙醇、甲醇等亲水溶剂 能与水以任意比例混合，有脱水作用。 原理：① 脱水作用；② ↓水的介电常数和蛋 白质溶解度。 优点：分辨率优于盐析法，能使某一Pr在狭小 有机溶剂浓度范围内沉淀。 缺点：易使Pr变性 应用：pI沉淀Pr。调节溶液pH到某Pr的pI，加上丙酮破 坏水化膜，Pr沉淀。 注意：防止Pr在分离过程中发生变性：①0－4 ℃下进行； ②有机溶剂浓度不能太高，Pr沉淀后立即分离;（三）层析（chromatography);离子交换层析法;带正电荷多蛋白紧密结合;Cation- exchange column;Column Chromatography;凝胶过滤法;亲和层析法;Affinity chromatography;（四）透析法（Dialysis）; 透析工作图;（五）超速离心; 超速离心;密度梯度离心;（六）Pr含量测定法 ; 考马斯亮蓝G250是一种带有负电荷的染料，在酸性条件下可与Pr上的正电荷结合，形成蓝色化物，在595nm具有特定吸收。;三、多肽链中氨基酸顺序分析——蛋白质一级结构的测定;方法;蛋白质（纯）;纯度、Mw和pI测定;一、名词解释;1.为什么说：“蛋白质是生命的物质基础”？ 2.简述蛋白质?螺旋和?折叠的结构特点。 3.什么是Pr的一、二、三和四级结构，分别指出 维持它们结构的化学键。 4.举例说明Pr结构与功能的关系。 5.简述Pr变性、沉淀和凝固的定义及彼此之间的关系。 6.Pr定量测定的方法主要有哪些？;1 天然蛋白质中不存???的氨基酸是 A蛋氨酸