常规病理切片流程－金寅春.pptVIP

常规HE病理切片制作流程 制作优良的病理切片是以充分的固定为前提的。 常规的固定方法是用10％的中性福尔马林，固定时间一般为24h，原则上组织与固定液的最佳比例是1:10，组织的厚度≤ 3mm 组织脱水： 乙醇是最常用的脱水剂，可以硬化组织，有明显收缩作用。为了避免组织过度的收缩，脱水过程应从低浓度向高浓度过渡，在无水乙醇中的时间不应过长，防止组织过度硬化。 处理步骤 处理时间（min） 75%乙醇 85%乙醇 95%乙醇 4. 无水乙醇Ⅰ、Ⅱ 60 90 90 各60 组织的透明： 二甲苯是常用的透明剂，对组织收缩性强，易使组织变脆变硬，因此时间不宜过长。其既与乙醇混合，又能溶解石蜡，可以达到使石蜡浸入组织的目的，折射指数接近组织蛋白折光指数，使组织细胞变透亮。 处理步骤 处理时间（min） 二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 各60 浸蜡： 置换出组织中的透明剂，使石蜡浸入组织，便于之后的包埋工作。 处理步骤 处理时间（min） 56~58℃石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 各90 组织的包埋： 组织经过上述一系列的浸透剂浸透，用包埋剂（石蜡）包起的过程。主要目的是给予组织一个承载介质，使其达到一定的硬度，利于切片。 通常使用56~60 ℃石蜡 熔点高的石蜡会使蜡块硬度更高，不易于切片，但能使切片更薄；反之熔点低的石蜡使得蜡块硬度较低，易于切片，但切片较厚。 切片： 要求切片完整，厚度4~6 μm，厚薄均匀，无褶皱无刀痕。 烤片： 一般在60 ℃左右烤箱内烤30min即可。 染色： 1.二甲苯Ⅰ5min 2.二甲苯Ⅱ5min 3.二甲苯Ⅲ5min 4.无水乙醇1min 5.95%乙醇Ⅰ1min 6.95%乙醇Ⅱ1min 7.75%乙醇1min 8.水洗1min 9.苏木精染色1~5min 10.水洗1min 11.1%盐酸酒精分化5~8s 12.水洗5min返蓝 13.95%乙醇1min 14.伊红染色15~30s 15.95%乙醇Ⅰ30s 16.95%乙醇Ⅱ30s 17.95%乙醇Ⅲ30s 18.无水乙醇Ⅰ1min 19.无水乙醇Ⅱ1min 20.无水乙醇Ⅲ1min 21.二甲苯Ⅰ（可加苯酚）1min 22.二甲苯Ⅱ1min 23.二甲苯Ⅲ1min 24.中性树胶封片 染色中注意事项： 脱蜡 组织切片脱蜡应彻底，主要取决于二甲苯的温度和时间，需要根据环境条件的不用做出相应的改变，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之一。 染色 石蜡切片经水后放入Harris苏木精染色，在新配的染液中只需染1min分钟左右，根据染片的多少逐步延长染色时间。苏木素的染色属于一种过染法，胞核胞质都会被染色，但细胞核中的带负电荷的染色质与带正电荷的苏木精结合的更为牢固，因此当用盐酸酒精进行分化，改变组织蛋白质的PH值，使胞质的苏木精被洗脱下来，所以分化的程度决定了染色的好坏，需要严格控制分化的时间。 脱水 切片染色后通过各级乙醇脱水，浓度应从低到高，，低浓度的乙醇对伊红有分化作用，在高浓度的乙醇中时间应相应延长，否则切片会有雾化的现象，在显微镜下组织结构模糊不清。 HE染色的质量标准：染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观 谢 谢！