快速连接试剂盒使用说明.pdfVIP

快速连接试剂盒使用说明 货号：QL0010 规格：20T 保存 ：-20 ℃保存。 产品内容： T4 DNALigase 20ul(4U/ul) 2 ×Quick Ligation Buffer 200ul 产品简介： 快 速 连 接 试 剂 盒 所 带 T4 DNA Ligase 能 催 化 dsDNA 、 dsRNA 或 DNA/ RNA 的 5 ’-磷酸末端和 3 ’-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能催 化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接，还可以修复双链 DNA 、RNA 或 DNA/ RNA 杂交双链中的单链切 口，在 2 ×Quick Ligation Buffer 中，室温（25 ℃） 下反应 5 分钟即可完成连接反应，反应液可直接用于转化，使用方便、快捷， 极大地缩短了试验时间。本试剂盒可应用于 DNA 片段克隆入载体、文库构建、 TA 克隆、Linker 连接以及线性 DNA 的再环化等试验。 单位定义： 在 2ul 连接反应体系、0.12uM （300ug/ ml ）的 5 ’-末端浓度条件下， 16 ℃反应 30 分钟，能使 50 ﹪Hind III 消化的 λDNA 片段连接上所需的酶量 定义为一个活性单位。 使用方法： 1、按下面配制反应体系 2 ×Quick Ligation Buffer 10ul 载体 50ng 插入片段 50-150ng T4 DNA Ligase 1ul dd H2O up to 20ul 2、室温下反应 5 分钟，反应产物冰上冷却，然后直接用于转化或冻存 于-20 ℃。注意不要热失活，热失活会急剧降低转化效率。当插入片段超过 1.5kb 时，延长反应时间至 15-30 分钟。 注意事项： 1 、2 ×Quick Ligation Buffer 用前应彻底混匀，避免反复冻融，可适当 分装成小份以保证质量。 2、为保证有效连接，总的载体 DNA 与插入片段的总浓度应在 1-10ug 之间。对单插入来说，插入片段:载体比例在 1:2-1:6 之间最好，低于 2:1 会 降低连接效率，高于 6:1 会产生重复插入。 3、如果是做电转化，请将连接产物纯化后再进行电转化。 相关试剂 ： T1060 50 ×TAE 缓冲液 G8142 GoldView ‖型核酸染色剂(5000 ×) D1010 6 ×DNA Lodding Buffer C1100 DH5 α 感受态细胞 C1200 TOP10 感受态细胞 D1100 质粒小量提取试剂盒 D1200 琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒 D1300 DNA 产物纯化试剂盒