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如何正确选择二抗 二抗选择指南 2012-03-28 20:18 来源： 丁香园 点击次数：691 关键词： 二抗 单抗 一 抗 片段 基因 如何选择正确的二抗？ 以下指南将帮助您选择最适合该应用的二抗。 常见问题 1.一抗的宿主物种是什么？ 2.需要了解哪些有关一抗同型的内容？ 3.需要酶学或荧光检测吗？ 4.是否需要预吸附的二抗？ 5.是否需要亲和纯化的抗体或 IgG 片段？ 6.有必要使用 F(ab) 或 F(ab)2 片段抗体吗？ 7.是否需要抗 IgG 重链和轻链、抗轻链或抗 F(ab)2 二抗？ 1. 一抗的宿主物种是什么？二抗指向一抗的物种。如果使用来源于兔的一抗， 则需要来源于 除兔以外的其它物种的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG - HL (HRP) 二抗 (ab6721) 可以 检测兔多克隆抗 Ki67 一抗 (ab15580)。 2. 需要了解哪些有关一抗同型的内容？二抗必须指向一抗同型。 多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴，并且是IgG 同型。二抗通常为抗 IgG 重链和轻 链的抗体。 单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。例如，如果单克 隆一抗为小鼠 IgG1，则 需要抗小鼠 IgG 或特异性较低的 F(ab) 片段抗小鼠 IgG。 人免疫球蛋白类、亚类、型和亚型： •类或同型：IgG (γ heavy chains), IgM (μ), IgA (α), IgE (ε), IgD (δ) •亚类： IgG1 (γ1 heavy chains), IgG2 (γ2), IgG3 (γ3), IgG4 (γ4); IgA1 (α1), IgA2 (α2) •型：κ light chain, λ light chain •亚型： λ1, λ2, λ3, λ4 其它类型的反应： •多价抗体与所有免疫球蛋白类反应 •抗 Fc 或重链 (α, δ, ε, γ, and μ) 抗体仅与重链反应 •抗 F(ab) 或完整分子抗体与重链和轻链反应，而与免疫球蛋白类无关 • 由于所有免疫球蛋白类均使用相同的 κ 和 λ 轻链，因此抗轻链（κ 和 λ ）抗 体 与所有 免疫球蛋白类反应 3. 需要酶学或荧光检测吗？偶联类型是依赖于应用的。 对于酶学和生物素检测，例如，在 WB 或 ELISA 中，建议将二抗偶联于 HRP, AP 或 生物素 。不论抗体宿主物种是什麽，抗生物素蛋白和链霉亲和素与生物 素的结合 作用均很强，并且 均能使信号放大。 如果使用了激光，例如，在流 式细胞术、ICC/IF 或 IHC 中使用时，则建议将二抗偶 联于荧 光染料进行荧 光检测。访问我们 荧光染料指南，为您的实验选择染料。 Learn more about the 查看更多关于使用DyLight ®荧光染料的特性与优点. 4. 是否需要预吸附的二抗？对于富含免疫球蛋白的组织和细胞，通常推荐使用 预吸附血清的 二抗于蛋白质印 迹应用。预吸附的二抗与内源免疫球蛋白发生相 互作用的可能性较低，因此 可降 低非特异性背景。二抗进行预吸附时，预吸附 样品应来源于与检测样品相同的物 种。例 如，在人组织中检测时，将需要人预 吸附抗体。 查看更多关于DyLight ®预吸附二抗的信息. 5. 是否需要亲和纯化的抗体或 IgG 片段？使用亲和纯化的抗体或 IgG 片段的 优点将取决于 预期的结合类型。亲和纯化的抗 体的非特异性结合量最低，而 IgG 片段包含高亲和抗体。事 实上，在亲和纯化中， 高亲和力抗体保持固定 在基质上并且不能被洗脱。 6.有必要使用 F(ab) 或 F(ab)2 片段抗体吗？F(ab) ) 和 F(ab)2 片段抗体消除 了抗体 Fc 部分与细胞（如巨噬细胞、树突细胞、 中性粒细胞、NK 细胞和 B 细胞）上 Fc 受体之间的 非特异性结合，并且由于它 们尺寸较小而能够更有效地渗透组织。 由于片段抗体不具有 Fc 部分，因此它们 不干扰抗 Fc 介导的抗体检测。 查看使用 F(ab) 或 F(ab)2 片段抗体的优点 7. 是否需要抗 IgG 重链和轻链、抗轻链或抗 F(ab)2 二抗？我们以不同形式提 供二抗： •抗 IgG 重链和轻链的抗体同时与 IgG 亚类的重链和轻链反应 •抗轻链抗体与在所有免疫球蛋白类中均相同的一抗轻链反应 •抗 F(ab)2 二抗与一抗的 F(ab)2 部分反应