SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞培养基说明书.PDF

SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞培养基说明书 DKW34-MCL1 产品描述： SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞培养基 （Serum-Free Medium for Lymphocyte ）适用于 小鼠淋巴细胞、DC 细胞的体外培养。本产品是一款化学成分限定的培养基，该培养基 中的所有成分均使用细胞培养级别的原料生产，不含血清，有效避免血清质量变动及血 清组分、外源成分对实验研究的影响，可实现小鼠淋巴细胞、DC 细胞等免疫细胞的体 外培养。 包装规格： 货号 名称 规格 SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞培养基 DKW34-MCL1 250ml Serum-Free Medium for Mouse Lymphocyte 使用方法： 例1：小鼠T淋巴细胞培养 1、培养器皿的预包被：取5μg/ml 小鼠CD3 单抗包被培养器皿，4℃过夜或37℃孵 育2 小时。使用前移除剩余包被液。 2 、将SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞培养基放置室温平衡。 3、无菌分离小鼠外周血淋巴细胞或脾脏淋巴细胞 （建议使用达优小鼠淋巴细胞分 液：DKW33-R0100 ）。 4 、根据计数结果，用 M-CultureTM 小鼠淋巴细胞培养基将分离获得的淋巴细胞按 6 2-2.5×10 个/ml 的浓度接种于已包被小鼠CD3 单抗的细胞培养器皿中，加入5μg/ml 的小 鼠CD28 单抗、300U/ml 的rmIL-2 ，刺激T 淋巴细胞的生长和增殖，37℃，5% CO 、饱 2 和湿度的培养箱中培养。 5、观察细胞活化状态，每 2-3 天取样计数细胞浓度并根据计数结果补充新鲜 TM 6 SuperCulture 小鼠淋巴细胞培养基 （含300U/ml 的rmIL-2 ），调整细胞浓度为 1.5×10 个/ml 。 6、收获细胞供后续检测或实验使用。 例2 ：小鼠骨髓DC细胞培养 1、 将SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞培养基放置室温平衡。 2 、 无菌分离小鼠骨髓单核细胞。根据计数结果，用 SuperCultureTM 小鼠淋巴细胞 6 培养基将分离获得的单核细胞按 1-5×10 个/ml 的浓度接种于6 孔板或 12 孔板中，每孔 加入终浓度200U/ml 的rmGM-CSF 和rmIL-4 ，37℃，5% CO 、饱和湿度的培养箱培养。 2 3、48 小时后，轻轻晃动培养板，吸弃全部培养基及悬浮细胞，加含 200U/ml 的 rmGM-CSF 和rmIL-4 的新鲜培养基继续培养。 4 、 隔日半量换液，即收集旧培养液，离心后用含200U/ml 的rmGM-CSF 和rmIL-4 的新鲜培养基重悬细胞沉淀，然后再将细胞悬液放回原皿。 5、 第6 天半量换液后加细胞因子TNF-α 1000U/ml 或其他促成熟的细胞因子，继 续培养两天，以促进树突状细胞成熟（可在 TNF-α 加入前 1 天加入抗原，以获得抗原 负载的DC ）。 6、 收集悬浮和轻微贴壁的细胞，即为成熟的DC 。 保存方法： 2～8℃，避光保存，保持无菌，保质期12 个月。 注意：  本品避免反复冻融，使用时注意无菌操作。  本品