弱酸性家蝇蛆抗菌肽MD_7095的分离纯化和性质研究.pdf

46 卷 　3 期 微 生 物 学 报 46 (3) :406～411 2006 年 6 月 4 日 Acta Microbiologica Sinica 4 June 2006 弱酸性家蝇蛆抗菌肽 MD7095 的分离纯化及性质研究 1 2 1 1 1 陆 　婕 ,汪俊汉 ,钟 　雅 ,赵燕英 ,陈正望 ( 1 2 ) 华中科技大学　 生命科学与技术学院生物物理与生物化学研究所　 附属医院　武汉　430074 摘 　要 :家蝇抗菌肽多是碱性蛋白 , 目前尚无弱酸性家蝇抗菌肽的报道。通过稀醋酸低温浸提,海藻酸吸附 ,稀盐 酸低温洗脱、盐析、Sephadex G25 凝胶过滤和 CMC23 弱阳离子交换柱层析等方法 ,利用灵敏的杀菌活性检测手段 ,从 ( ) ( ) 家蝇蛆 Musca domestica larvae 中分离纯化出一组弱酸性抗菌肽 ,对苏云金芽孢杆菌 Bacillus thuringiensis 等革兰氏 阳性菌和几种革兰氏阴性菌有强烈的杀灭作用 ,有极强的耐热、耐冻融的特性。通过电洗脱方法进一步纯化出抗 ( ) 菌肽 MD7095 ,质谱测定其分子量 7095Da ,IEF 电泳测得其等电点559 ,经肽质量指纹谱 PMF 鉴定为一新肽。扫描电 镜超微结构观察表明 ,弱酸性家蝇蛆抗菌肽对苏云金芽孢杆菌的杀菌机制主要是使细胞膜穿孔 , 内容物外泄,最终 使细菌完全解体死亡。 关键词 : 家蝇蛆 ;抗菌肽 ;抗菌活性 ;细胞膜穿孔 中图分类号:Q5143 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2006) [2～4 ] ( 　　抗生素在现代医学发展史上起到了很重要的作 肽 Diptericin 等抗菌蛋白 , 但未对家蝇 Musca 用 ,但随着抗生素的广泛和长期使用 , 以及日益严重 domestica) 抗菌肽进行研究 ;家蝇属昆虫纲 ,双翅目 , 的抗生素滥用现实 ,造成细菌发生突变 ,产生耐药 环裂亚目、蝇科 ,是我国大部分地区最常见、数量最 性。传统的抗生素是通过抑制细菌的蛋白质或 多的一种蝇类。家蝇中存在大量抗菌活性物质 ,对 DNA 的合成以及破坏细胞壁来发挥作用 ,其过程需 抗菌药物的开发具有重要的意义。但家蝇中抗菌肽 要特殊受体 ,微生物很容易通过基因突变对药物产 的种类较多 ,成分复杂 ,提取得率低 ,很难分离纯化 , 生抗性。抗菌肽作用机理不同于传统抗生素 ,一般 国内学者的研究多停留在免疫血淋巴的阶段 , 已报 是通过物理作用造成细胞膜的穿孔 ,不需要特殊的 道的家蝇抗菌肽均为碱性蛋白[5～9 ] 。 受体 ,不会导致抗药菌株的产生 ,因此极有希望开发