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江苏农业科学 2013年第41卷第8期 -—·—43--—— 崔志伟，王康才，郑 晖，等．DNA条形码序列对不同品种金银花的鉴定[J]．江苏农业科学，2013，41(8)：43—45 DNA条形码序列对不同品种金银花的鉴定 崔志伟 ，王康才 ，郑 晖 ，张彦南 (1．南京农业大学园艺学院，江苏南京210095；2．三明生物工程公司，江苏镇江212000) 摘要：采用DNA条形码序列对不同品种的金银花进行鉴定，为金银花的鉴定提供分子依据。主要选择ITS2和 psM —trnH序列进行评价 ，以扩增及测序成功率、变异位点数和 K一2一P距离等指标评价各序列的鉴定能力。此外， 基于MEGA4．0分析不同品种金银花序列种间K一2一P遗传距离并构建 NJ树。结果表明：不同品种金银花ITS2和 psbA—trnH序列的扩增及测序成功率均较高，扩增成功率为 100％，ITS2和psbA—tmH的测序成功率分别为72．7％、 91％，且两者均存在较多的变异位点，可以有效地区分金银花不同品种。说明ITS2和psbA—tmH可以作为鉴定金银 花不同品种的优势条形码组合。 关键词：DNA条形码；ITS2；psbA—tmH；金银花 中图分类号：$567．790．1 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)08—0043—03 金银花为忍冬科植物忍冬 (Lonicerajaponica)的干燥花蕾 鉴定为忍冬科忍冬属忍冬 (表 1)。试验材料种植于南京农业 或带初开的花，具有清热解毒、凉散风热之功效…，是国内市 大学牌楼实验基地。 场上的大宗药材。山东临沂地区和河南省新密县为道地产 表1 金银花品种采集地及 GenBank登录号 区，主要栽培品种有四季花、大毛花、鸡爪花等。近年来 ，由于 市场对金银花的需求不断增加，价格偏高，国内多地大面积引 种栽培 ，形成了许多金银花新产区。有研究发现，不同产地、 不同品种金银花药材品质差异较大，因此如何保证金银花药 材质量成为人们关注的问题。由于不同品种药材性状及原植 物形态比较相似 ，因而亟需新的技术鉴别不同品种。目前，关 于该项研究已有报道 ，如细胞学 (包括核型和染色体多态性) 和RAPD、ISSR等DNA分子标记方面的研究 。近年来 ， DNA条形码技术发展较快，可直接利用 DNA序列进行物种 的鉴定，具有过程简便、结果可靠性强等特点，为药用植物的 鉴定提供了新的机遇 。。Chen等首先运用内转录第2间 隔区(internaltranscribedspace2，ITS2)对被子植物、裸子植物 注：“一”表示测序未成功；下表同。 等七大类群的6000多份药用植物样本进行 DNA条形码鉴 定，其物种水平鉴定效率达92．7％ J。而众多学者推荐 的 1．2 DNA提取、PCR扩增、PCR产物纯化及测序 psbA—trnH序列在扩增成功率和物种识别率方面也有优良的 选取新鲜的叶片0．1g，经液氮研磨后，使用植物DNA提 表现_9 ，尤其在有花植物中展现 了较好 的种间鉴别价 取试剂盒 (天根生化科技有限公司)提取总DNA，PCR反应采 值 ，已被用于芍药属 、薯蓣属 等植物的种间鉴别研 用通用引物，反应体系及扩增程序均参照文献[15]，进行1％ 究，但未见关于金银花不同品种间鉴别的相关研究报道。因 琼脂糖凝胶电泳。随后用琼脂糖凝胶试剂盒 (天根生化科技 此，本试验研究上述2条DNA条形码在不同品种金银花中的 有限公司)对扩增 目的片段进行 回收，纯化后作为测序反应 差异，以期为不同金银花品种在分子水平上的鉴定提供依据。 的模板，送至上海英骏 (Invitrogen)生物技术公司进行双向测 序 ，测序引物同PCR引物。 1 材料与方法 1．3 数据分析